312基因工程的基本操作程序丽.ppt

1 、基因工程的概念，操作水平，原理 2 、基因拼接的理论基础 3 、外源基因表达的理论基础 4 、限制酶的作用特点，作用部位，作用结果 5 、 DNA 连接酶和 DNA 聚合酶的异同点 6 、载体需要具备的条件，常用载体的种类 复习回顾： 已知标记基因有抗四环素和抗氨苄青霉素 , 现探讨某 质粒中有无标记基因或标记基因是什么 ? 根据实验结 果得出相应的结论。 对照组： 不加抗 生素 实验组 1 ： 加四环素 实验组 2 ： 加氨苄 青霉素 实验组 3 ： 加四环素和 氨苄青霉素 对照 组 实验 组 1 实验 组 2 实验 组 3 结 论 预期一 + + + + 预期二 + + - - 预期三 + - + - 预期四 + - - - 既含有抗四环素基因也含有抗 氨苄青霉素基因 只含有抗四环素基因 只含有抗氨苄青霉素基因 既不含有抗四环素基因也 不含有抗氨苄青霉素基因 “ + ”“ - ” 分别 表示有无细 菌生长 原核细胞的基因结构 真核细胞的基因结构 （ 启动子 ） （终止子） （终止子） （ 启动子 ） 基因工程的基本操作程序 一、目的基因的获取 二、基因表达载体的构建 三、将目的基因导入受体细胞 四、目的基因的检测与鉴定 目的基因主要是指 ______________________ 编码蛋白质的结构基因 目的基因的获取 供体生物细胞 取出 DNA 用限制酶剪 去多余部分 目的基因 即：将需要的基因从供体生物细胞内提取出来 目前被广泛提取使 用的目的基因有：苏 云金芽孢杆菌抗虫基 因、植物抗病基因 （抗病毒、抗细菌 ) 、 人胰岛素基因等。 1 、从 基因文库 中获取目的基因 1 ）什么是基因文库？ 2 ）怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因？ 种类： 基因组文库 ： 部分基因文库 (cDNA 文库 ) ： 获得目的基因的方法 2 ）利用 PCR 技术 扩增目的基因 3 ） 人工合成 含有一种生物的 基因 含有一种生物的 基因 根据基因的有关信息： 如基因的表达产物 蛋白质 全部 部分 1 、从 基因文库 中获取目的基因 1 ）什么是基因文库？ 2 ）怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因？ 种类： 基因组文库 ： 部分基因文库 (cDNA 文库 ) ： 获得目的基因的方法 2 ）利用 PCR 技术 扩增目的基因 3 ） 人工合成 含有一种生物的 基因 含有一种生物的 基因 根据基因的有关信息： 如基因的表达产物 蛋白质 全部 部分 1. 用一定的 _________ 切割 质粒，使其出现一个切 口，露出 ____________ 。 2. 用 _____________ 切断目 的基因，使其产生 _____ ____________ 。 —— 核心 3. 将切下的目的基因片段插入质粒的 ______ 处， 再加入适量 ___________ ，形成了一个 重组 DNA 分子（重组质粒） 限制酶 黏性末端 同一种限制酶 的黏性末端 切口 DNA 连接酶 相同 ( 二 ) 基因表达载体的构建 科学家在培育抗虫棉时，经过了许多复杂 的过程和不懈的努力，才获得成功。 起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载 体质粒中，然后导入棉花的受精卵中，结果抗 虫基因在棉花体内没有表达。 然后在插入抗虫基因的质粒中插入启动子 ( 抗虫基因首端 ) ，导入棉花受精卵，长成的棉 花植株还是没有抗虫能力。科学家又在有启动 子、抗虫基因的质粒中插入终止子 ( 抗虫基因末 端 ) ，导入棉花受精卵，结果成长的植株，有了 抗虫能力。 资 料 : 基因表达载体的组成： 目的：使目的基因在受体细胞中稳定存 在，并且可以遗传给下一代，同时使目 的基因能够表达和发挥作用。 a 、 目的基因 b 、 启动子 c 、 终止子 d 、 标记基因 e 、 复制原点 ( 三 ) 将目的基因导入受体细胞 ? 常用的受体细胞