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羟胺与烷化剂诱变机制 烷化剂 ? 能使一些碱基烷基化，比如使鸟苷酸甲基化，影响 mRNA 的转录，从而使蛋白质的表达紊乱，使得蛋白 质重组，而改变了性状。临床上应用此类物质作为抗 癌药物，具有强烈杀伤癌细胞的作用，应用时，要注 意强烈杀伤性。 ? 甲基磺酸乙酯 (EMS) ，诱变率很高。常用浓度 0.05~ 0.5mol/L ，作用时间 5~60min 。该物质具有强烈致癌性 和挥发性，可用 5% 硫代硫酸钠作为终止剂和解毒剂。 ? 硫酸二乙酯 (DMS) ，由于毒性太强，目前很少使用， 属于剧毒品，受公安局管治。 烷化剂 ? 乙烯亚胺 ，生产的较少，很难买到。只要用于大量 诱变育种用，使用浓度： 0.0001~0.1% ，高度致癌性！ 使用时需要使用缓冲液配置。 ? 盐酸氮芥 ，用于抗癌药物。 一般是针剂，稍加稀释 即可使用，作用时间 5~10min ，可用甘氨酸作为终止 剂和解毒剂。 ? 间接置换诱变是通过活细胞的代谢活动掺入到 DNA 分子中引起的。 ? 主要为一些碱基类似物： 5- 溴尿嘧啶 (5-BU) ； 5- 氨基尿嘧啶 (5-AU) ； 8- 氮鸟嘌呤 (8-NG) ； 2- 氨基嘌呤 (2-AP) ； 6- 氯嘌呤 (6-CP) 等。 b. 间接置换诱变剂 5- 溴尿嘧啶的诱变机制 酮式 烯醇式 Mutagenic efffects of 5-bromouracil 2- 氨基嘌呤的诱变机制 氨基 亚氨基 6- 甲基鸟嘌呤的诱变机制 (2) 移码突变 (frame-shift mutation): 指诱变剂使 DNA 分子中的一个或少数几个核苷 酸的增添（插失）或缺失，从而使该部位后面的 全部遗传密码发生转录和转移错误的一类突变。 由移码突变所产生的突变株，称为移码突变株。 影印培养法是使在一系列培养皿的相同位置上能出现 相同菌落的一种接种培养方法。 1952 年 黎德伯格 (J. Lederberg) 夫妇首先进行的实验。 要点 ：包有灭菌丝绒布的木质圆柱（直径略小于培养皿 底）为印章，用不具抗性环境（如不加抗生素等）的完 全培养基进行培养，以印章轻轻粘取菌落，然后再一一 接种到不同的选择培养基（如含有不同抗生素等）上， 培养后，对各培养皿相同位置上的菌落作比较，便可选 出相应的突变型菌落。 影印实验 (replica plating) Joshua Lederberg and Esther Lederberg (1952) 首先把大量对链霉素敏感的 大肠杆菌 K12 涂布在 不含链 霉素 的平板 (1) 的表面，待其长出密集的小菌落后，用影印 法接种到 不含链霉素 的培养基平板 (2) 上，随即再影印到 含 链霉素 的选择性培养基平板 (3) 上。 经培养后，在平板 (3) 上出现了个别抗链霉素的菌落。对 培养皿 (2) 和 (3) 进行比较，就可在平板 (2) 的相应位置上找到 平板 (3) 上那几个抗性菌落的“孪生兄弟”。 然后把平板 (2) 中最明显的一个部位上的菌落（实际上是 许多菌落）挑至不含链霉素的培养液 (4) 中，经培养后，再 涂布在平板 (5) 上，并重复以上各步骤。 上述过程几经重复后，只要涂上越来越少的原菌液至相 当于平板 (1) 的培养皿 (5) 和 (9) 中，就可出现越来越多的抗性 菌落，最后甚至可以得到完全纯的抗性菌群体。 解释 ：原始的链霉素敏感菌株只通过 (1)→(2)→(4)→(5)→(6) →(8)→(9)→(10)→(12) 的移种和选择序列，就可在根本未接 触链霉素的情况下，筛选出大量的抗链霉素的菌株。微生 物抗药性是自发产生的，并与相应的环境因素毫不相干。 ⑴ ⑵ ⑶ ⑷ ⑸ ⑹ ⑺ ⑻ ⑼ ⑽ ⑾ 含链霉素培养皿 不含链霉素培养皿 原始 敏感株 replica plating 影印的作用可保证这 3 个平板上所生长的菌落的亲缘和相对位置保持严格的对应性 ⑿ 影印培养技术 突变发生在曝露青霉素之前 Screening for phenotypes by replica plating 黎德伯格 J. Lederberg J. Lederberg is awarded the Noble Prize in Medicine and Physiology in