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生物组织中还原性糖、脂肪、蛋白质的鉴定
1实验原理
某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物产生特定的
颜色反应。
(1)还原糖+斐林试剂水川砖红色沉淀
现用现配)
还原糖:葡萄糖、果糖、麦芽糖(蔗糖、淀粉等是非还原糖)
苏丹Ⅲ染液镜检橘黄色
(2)脂肪+
苏丹Ⅳ染液镜检红色
(3)蛋白质+双缩脲试剂
紫色
双缩脲(NH2-CO-NHC0-NH2)是两个分子脲(即尿
素)经180℃左右加热,放出一个分子氨(NH3)后
得到的产物。
双缩脲反应即在碱性溶液(NaOH)中,双缩脲能与铜
离子(Cu2+)作用,形成紫红色络合物。
双缩脲试剂用于通过双缩脲反应检测双缩脲,因蛋
白质中也有CONH基也可用于检验蛋白质,与蛋白
质接触后的颜色呈紫色
(4)淀粉+碘液—蓝色
2实验步骤:
(1)还原糖的鉴定
选材:含糖量较高,白色或近于白色的植物组织
制浆
制备组织样液过滤(用层纱布)
取液
颜组织样液
刚配制的斐
林试剂1mL
变成砖红色
呈现蓝色(三
(注:斐林试剂的甲液和乙液等量混合均匀后使用)
结论:还原糖与斐林试剂在加热煮沸的过程中生成砖红色沉淀
(2)脂肪的鉴定
取材:花生种子浸泡3~4h,将子叶削成薄片
①取最理想的薄片
②染色:滴2~3滴苏丹Ⅲ染色3min或苏丹Ⅳlmin
制片
③去浮色:1~2滴50%的酒精
④制成临时装片:吸、滴、盖
镜检:在低倍镜下找到已着色的花生子叶最薄处
然后用高倍镜观察
结论:脂肪能被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色或被苏丹Ⅳ染成红色
(3)蛋白质的鉴定
选/鸡蛋白加水稀释,蛋清液
黄豆研磨。豆浆过滤滤液
(浸泡1-2d)
颜组织样液
双缩脲试剂A
双缩脲试剂B
无色
紫色
结论:蛋白质与双缩脲试剂发生反应,产生紫色反应
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