液相色谱手性物质分离工作总结(PPT52张)[文字可编辑].ppt

? 样品前处理： 1. 1~2mg EtOH ， MeOH 溶解。 2. 如难溶，且为盐，加入酸碱添加剂助溶。酸碱总浓度不 要大于 1% ，且要有空白对照。 3. 也可以先以少量 DMSO ， DMF ， CHCl2 溶解，然后再用 流动相稀释至不析出为止。 4. 如果样品紫外吸收很弱，则需加大样品浓度至 10mg/ml. 5. 无紫外吸收，换检测器： ELSD 或 MS ，或者让合成人员 接生色基团。 6. 过滤进样。 ? 选择合适的手性柱： 从手性固定相对样品的通用性，适应范围 考虑。如果是制备服务，在选择手性柱时 还应考虑柱容量（柱样品荷载量）。 各商品化的手性柱使用顺序大致为： IA （或 AD-H ） ,IC ， OD-H ， AS-H ， OJ-H ? 流动相条件优化 以无水乙醇 / 正己烷为初始流动相，比例通过调整流动相中醇的含量或者改变 醇的种类来增强对映体分离选择性。如果酸碱样品只有部分分离、没有分离 或者峰形差、不出峰，可在流动相中添加 有机酸、碱等改性剂来优化分离。 涂敷型 中性： Hexane ： EtOH=70 ： 30(V/V%) ，流速： 0.8ml/min 酸性：含有 -COOH ，加入 TFA 碱性：含有 -NH2 ， -NH- 加入 DEA ，如峰形没有改善，可加 入叔丁胺或者 MEA 酸碱基团都有：加入 TFA ，或者 TFA 与 DEA 混合的盐或 MSA(0.1%) 添加剂含量 0.05%~0.3% 。 键合型 ： ? 柱温考察：常规温度加减 10~15 度 1. 常规条件： 30 度 2. 低温： 15 度 3. 高温： 40 度 流动相的极性： 常用溶剂极性表 .xls 流动相的互溶性： 溶剂互溶表 .pdf 常用溶剂物性必备 四 . 手性分离的特殊例子 手性分离中的梯度模式 min 10 15 20 25 30 35 mAU 0 200 400 600 800 1000 VWD1 A, Wavelength=220 nm (2010040000006.D) 1 4 . 9 1 9 1 6 . 1 9 6 2 6 . 2 2 5 Hexane ： IPA=99 ： 1(v/v%) N N O NH O Si Boc 手性分析工作总结 2010.09.10 朱万夏 ? 一 . 手性现象的介绍 ? 二 . 仪器手性拆分方式 ? 三 . 液相手性柱分析方法开发流程 ? 四 . 工作中的一些实例讨论 一 . 手性现象的介绍 ? 概念： 问 : 什么是手性？ 答 : 分子组成与构造完全相同但分子的立体结构不 同的化合物 , 他们不能完全叠合却互为镜像 ,( 如 左手与右手 ), 这种特性就叫 手性 (chirality) 。而 这两个互为物体与镜像关系的立体异构体 , 称为 对映异构体 (enantiomers) 。 等量对映体的混 合物，其旋光性相互抵消，没有旋光能力，称 为 外消旋体 。 C C COOH OH H CH 3 HOOC HO CH 3 H CH 3 CHCOOH OH 乳酸 ? 手性分子的研究历史 ? 1801 年 Hauy 发现水晶晶体显示半面现象。 ? 1809 年 Malus 观察到水晶晶体引起的偏光效应。 ? 1812 年 Biot 发现了水晶片的旋光性 ? 1815 年 Biot 将研究延伸到有机物及其溶液，发现除石英外樟脑、柠檬油、 松节油等酒精溶液以及蔗糖、酒石酸水溶液剂许多液体有机化合物 具有旋光性。 ? 1848 年 Pasteur 在 28 岁时，研究酒石酸钠时发现有两种晶体。他在 放大镜 下 根据晶形的不同用 镊子 将其分成两份，配制成溶液测旋光，发现一 左旋、一右旋。又从结构上推想和分子结构的不对称联系起来，认 为一物一像。（历史上第一个手性拆分实验） ? 1874 年 J.H. van