Q_SZY 037-2020超浓缩复合枯草芽孢杆菌.pdf

Q/SZY 深圳市水之源生物科技有限责任公司企业标准 Q/SZY 037-2020 超浓缩复合 枯草芽孢杆菌 2020-04-18发布 2020-04-18实施 深圳市水之源生物科技有限责任公司发 布 前 言 本标准由深圳市水之源生物科技有限责任公司提出。 本标准由深圳市水之源生物科技有限责任公司起草。 本标准主要起草人：宋会峰 1、范围 本标准规定了枯草芽孢杆菌的形态学鉴定、生化鉴定以及 PCR、荧光PCR 检测鉴定方法。 本标准适用于枯草芽孢杆菌检测鉴定。 2、规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本使用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本 （包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规则和试验方法 GB19489 实验室 生物安全通用要求 WS/T230 临床诊断中聚合酶链反应 （PCR）技术的应用。 3、术语和定义 高活性枯草芽孢杆菌是由枯草芽孢杆菌和适宜基质配制而成的活体微生物制品。 4、人员防护 为了保护实验室人员的安全，应由具备资格的工作人员检测，所有培养物应小心处置。在对微生物菌 剂的取样和检测过程中，按照 GB19489 中的生物二级防护的规定执行。 45 要求 5.1 菌种 生产者须提供菌种的分类鉴定报告，包括属及种的学名、形态、生理生化特性及鉴定依据等完整资 料， 以及菌种安全性评价资料。采用生物工程菌，应具有获准允许大面积释放的生物安全性有关批 文。 6、主要仪器和设备 6.1 天平：精度为 0.1g。 6.2 恒温培养箱：30±1℃。 6.3 恒温水浴锅 6.4 离心机：转速 12000r/min 以上 6.5 PCR 仪 6.6 荧光 PCR 仪 6.7 微量移液器和灭菌吸头：10μ l、20μ l、200μ l、1000μ l。 7、样品制备、培养 -1 -10 以无菌操作将检样 25g(ml)用灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液做成 10 ～10 的稀释液，充分混匀。 选择适宜的 2 个～3个连续稀释度的菌液 1ml 于灭菌平皿内，将冷却到 40℃～50℃的营养琼脂倒入 平皿，轻轻混匀，制成混板，每个稀释度做连个平行样。待培养基凝固后倒置于 30℃±1℃恒温培养箱 内培养24h～48h。挑取平板上3个～5个无色透明菌落进行形态学鉴定并挑单菌落转营养肉汤 30℃ ±1℃恒温培养箱内增菌培养 18h～24h 后进行生化鉴定。 8、形态学及生化鉴定 8.1 革兰氏及芽孢染色 将第 7 章中平板上的菌落做成图片进行革兰氏和芽孢染色，镜检。 8.2 生化鉴定法 取菌液利用细菌微量生化鉴定管进行生化鉴定，每管 100μ l。 8.3 枯草芽孢杆菌形态学及生化特征 枯草芽孢杆菌为革兰氏阳性杆状细菌，细胞直径＜1μ m，很少成链，鞭毛侧生，内生孢子，芽 孢不膨大，不形成伴孢晶体。生化特征见表 1 表 1枯草芽孢杆菌生化特征 鉴定项目 枯草芽孢杆菌 接触酶 + 氧化酶 + 厌氧生长 - VP 试验 + VP＜PH6 -/+