用酵母双杂交系统研究蛋白质-蛋白质相互作用.pptxVIP

用酵母双杂交系统研究蛋白质-蛋白质相互作用;蛋白质之间相互作用研究的重要性;研究蛋白质相互作用的常用方法; 酵母双杂交系统是在真核模式生物酵母中进行的，研究活细胞内蛋白质相互作用，对蛋白质之间微弱的、瞬间的作用也能通过报告基因的表达产物敏感地检测得到。;一、酵母双杂交系统的建立和基本原理; 1989年美国纽约州立大学的Fields和Song首先描述了酵母双杂交系统(yeast two-hybrid system)。 该系统的建立是基于对真核生物调控转录起始过程的认识。真核生物基因转录需要反???转录激活因子的参与，真核生长转录因子含有两个不同的结构域：; 这两个结构域各具功能，互不影响, 单独存在时没有转录激活的功能，只有两者通过共价或非共价键连接建立起来的空间结构方可表现出一个完整的激活特定基因表达的激活因子的功能。; Gal4为酵母半乳糖苷酶基因gal1的转录激活因子，天然的Gal4分子是由一条由881个氨基酸残基组成的多肽链。 两个结构域中的DNA-BD由位于N-末端的1～147位多肽构成，能识别位于Gal4基因的上游激活序列(upstream activation sequence，UAS)。 此外，在其N-端还具有一段核定位序列。AD由位于C-末端的768～881位多肽构成。