实验三 植物组织RNA提取与分析.ppt

浆莹大 某1AN心 AGRICUL以卫 AL UNIVEREITY 实验三植物组织RNA的提取与鉴定 咽法目表业 浆莹大 某1AN心 AGRICUL以卫 AL UNIVEREITY 实验目的 (1)通过本实验,了解RNA的结构和特点 2)学会使用Tro法提取植物总RNA (3)学习和掌握总RNA的检测实验技术和实验 原理 咽法目表业 浆莹大 某1AN心 AGRICUL以卫 AL UNIVEREITY 实验原理 RNA的提取是进行分子克隆和基因表达分析等研究的基 但RNA很容易被内源及外源的 RNase降解,所以要得到 未被降解的、不含DNA与其它杂质的RNA是进行分子生物学 研究的前提。 目前较为成熟的分离RNA的方法有许多,用于植物细胞 总RNA的提取主要有苯酚法、异硫氰酸胍法、氯化锂沉淀法、 SDS/酚抽提法,或应用商品化的Tol试剂和 Qiagen等各类试 剂盒进行提取。但由于植物细胞具有坚硬的细胞壁,内含较 多的多糖、脂质、多酚等次生代谢物,同种植物的不同组织 和不同植物的同种组织材料,其RNA的提取方法也会有很大 差异。适宜的RNA提取材料处理方法也不尽相同。 咽法目表业 病浆大率 某1AN心 AGRICUL以卫 AL UNIVEREITY 实验原理 Trizol试剂是由苯酚和硫氰酸胍配制而成的单相的快速 抽提总RNA的试剂,在匀浆和裂解过程中,能在破碎细胞 降解细胞其它成分的同时保持RNA的完整性。在氯仿抽提 离心分离后,RNA处于水相中,将水相转管后用异丙醇沉淀 RNA 用这种方法得到的总RNA中蛋白质和DNA污染很少 可以用来做 Norther, RT-PCR,分离mRNA,体外翻译和分 子克隆等。 咽法目表业 三、仪和试剂 仪器 高速冷冻离心机、微波炉、稳压电源、水平电泳槽 凝胶成像系统 2、材料与试剂 液氪、 Trizol、氯仿、异丙醇、70%乙醇、DEPC处 理的蒸馏水、琼脂糖、1×TAE、上样缓冲液、 咽法目表业