免疫组化原理、步骤及要注意的事项.docxVIP

免疫组化 一，免疫组织化学简介 免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原 位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应炕原进行定性、定位、定量 测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来， 借助显微镜（包括荧光显微镜、电子显微镜）的显像和放大作用，在细胞、亚细胞 水平检测各种抗原物质（如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等 ）。 二，免疫组化技术的基本原理 免疫组化技术是一种综合定性、定位和定量；形态、机能和代谢密切结合为一体 的研究和检测技术。在原位检测出病原的同时，还能观察到组织病变与该病原的 关系，确认受染细胞类型，从而有助于了解疾病的发病机理和病理过程。 免疫酶组化技术是通过共价键将酶连接在抗体上， 制成酶标抗体，再借酶对底物 的特异催化作用，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，于普通显 微镜或电镜下进行细胞表面及细胞内各种抗原成分的定位，根据酶标记的部位可 将其分为直接法（一步法）、间接法（二步法）、桥联法（多步法）等，用于标记 的抗体可以是用免疫动物制备的多克隆抗体或特异性单克隆抗体， 最好是特异性 强的高效价的单克隆抗体。直接法是将酶直接标记在第一抗体上，间接法是将酶 标记在第二抗体上，检测组织细胞内的特定抗原物质。目前通常选用免疫酶组化 间接染色法。 三，免疫组化步骤 切片，烤片60C, 1h