微生物试验技术01——微生物地分离和纯化.pdf

实用标准文案 微生物的分离和纯化 一、目的要求 掌握倒平板的方法和几种分离纯化微生物的基本操作技术。 二、基本原理 在土壤、水、空气或人及动、植物体中，不同种类的微生物绝大多数都是混杂生 活在一起，当我们希望获得某一种微生物时，就必须从混杂的微生物类群中分离它， 以得到只含有这一种微生物的纯培养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯 化。 为了获得某种微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件 要求不同，而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长，而抑 制其他菌生长的环境，从而淘汰其他一些不需要的微生物，再用稀释涂布平板法或稀 释混合平板法或平板划线分离法等分离、纯化该微生物，直至得到纯菌株。 土壤是微生物生活的大本营，在这里生活的微生物无论是数量和种类都是极其多 样的，因此，土壤是我们开发利用微生物资源的重要基地，可以从其中分离、纯化到 许多有用的菌株。 三、器 材 高氏 1 号琼脂培养基，肉膏蛋白胨琼脂培养基，马丁氏琼脂培养基，盛 9ml 无菌 水的试管，盛 90ml 无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶，无菌玻璃涂棒，无菌吸管，接 种环， 10% 酚，无菌培养皿，链霉素，土样等。 四、操作步骤 1 、稀释涂布平板法 精彩文档 实用标准文案 （1 ）倒平板 将肉膏蛋白胨培养基、 高氏 1 号琼脂培养基、 马丁氏琼脂培养基溶化， 待冷至 55-60 ℃，向高氏 1 号琼脂培养基中加入 10% 酚数滴，向马丁氏培养中加入链霉 素溶液，使每毫升培养基中含链霉素 30ug 。然后分别倒平板， 每种培养基倒三皿， 其方 法是右手持盛培养基的试管或三角烧瓶， 置火焰旁边， 左手拿平皿并松动试管塞或瓶塞， 用手掌边缘和小指、无名指夹住拨出，如果试管内或三角烧瓶内的培养基一次可用完， 则管塞或瓶塞不必夹在手指中。试管（瓶）口在火焰上灭菌，然后左手将培养皿盖在火 焰附近打开一缝， 迅速倒入培养基约 15ml ，加盖后轻轻摇动培养皿， 使培养基均匀分布， 平置于桌面上，待凝后即成平板。也可将平皿放在火焰附近的桌面上，用左手的食指和 中指夹住管塞并打开培养皿，再注入培养基，摇匀制成平板。最好是将平板放室温 2-3 天，或 37 ℃培养 24 小时，检查无菌落及皿盖无冷凝水后再使用。 （2 ）制备土壤稀释液 称取土样 10g ，放入盛 90ml 无菌水并带有玻璃珠的三角烧 瓶中，振摇约 20 分钟，使土样与水充分混合，将菌分散。用一支 1ml 无菌吸管从中吸 取 1ml 土壤悬液注入盛有 9ml 无菌水的试管中，吹吸三次， 使充分混匀。 然后再用一支 1ml 无菌吸管从此试管中吸取 1ml 注入另一盛有 9ml 无菌水的试管中，以此类推制成 10-1 、 10-2 、10 -3 、10 -4 、10 -5 、10 -6 、各种稀释度的土壤溶液。 （3 ）涂布 将上述每种培养基的三个平板底面分别用记号笔写上 10 -4 、10-5 和 10 -6 三种稀释度， 然后用三支 1ml 无菌吸管分别由 10-4 、10 -5 和 10-6 三管土壤稀释液中各吸 取 0.2ml 对号放入已写好稀释度的平板中，用无菌玻璃涂棒在培养基表面轻轻地涂布均 匀。 （4 ）培养 将高氏 1 号培养基平板和马丁氏培养基平板倒置于 28 ℃温室中培养 3~5 日，肉膏蛋白胨平板倒置于 37 ℃温室中培养 2-3 日。