平板菌落数法.ppt

微生物学实验 实验八 微生物检测 刘森林 执 教 单 位 生命科学学院 ? 学习平板菌落计数法。 实验目的 实验原理 ? 1 ．编号 ? 取无菌平皿 9 个，分别用记号笔标明 10-4 、 10-5 、 10-6 （稀释度） 各三套。另取 6 支试管，加入 9ml 无菌水，依次标明 10-2 、 10-3 、 10-4 、 10-5 、 10-6 。 ? 2 ．稀释 ? 水样：用 1ml 无菌试管吸取 1ml 样品精确加入加有 9ml 无菌水的 10-1 的试管中，此即为 10 倍稀释。将 10-1 试管振荡，使其充分混匀。用 另一吸管吸取 10-1 菌液 1ml ，精确加入 0.5ml 至 10-2 试管中，此即为 100 倍稀释。其余 10-3 、 10-4 、 10-5 、 10-6 依次类推。 ? 固体样品：准确称取 10g 上午膜样，加入 90ml 无菌水中，充分混匀 后即为 10 倍稀释。将 10-1 试管振荡，使其充分混匀。用另一吸管吸 取 10-1 稀释液 1ml ，精确加入 0.5ml 至 10-2 试管中，此即为 100 倍稀 释。其余 10-3 、 10-4 、 10-5 、 10-6 依次类推。 三 . 实验步骤 ? 3 ．加样倒平板： ? 用不同的灭菌吸管分别吸取 10-4 、 10-5 、 10-6 稀 释液 1ml ，分别注入 3 个灭菌培养皿中。分别立 即倾注约 15ml 已熔化并冷却到 45? 左右的牛肉 膏蛋白胨培养基，并立即在桌面上作平面旋摇， 使水样与培养基充分混匀（每稀释度做 3 个）。 另取一空的灭菌培养皿，倾注牛肉膏蛋白胨培养 基 15ml ，做空白对照。培养基凝固后，倒置于 37 ℃温箱中培养。 三 . 实验步骤 ? 4 ．计数 ? 培养 24-48h 后，取出培养平板，并按下 列公式进行计算： ? 每毫升中菌落形成单位（ cfu ） = 同一稀 释度的平均菌落数 x 稀释倍数 ? 注： 一般选择每个平板上长有 30-300 个 菌落的稀释度计算每毫升的含菌量较适宜。 三 . 实验步骤 ? 三．作业： ? 计算菌体含量 ( 单位 :cfu/mL) 。