免疫扩散实验生物技术第四组.ppt

免疫扩散实验(双向双扩散) 2010级生物技术第四组  实验目的 了解双向琼脂扩散的原理和用途。 掌握抗体效价的测定方法 观察抗原、抗体在琼脂板中形成的沉淀线  实验原理 双向双扩散简称双扩散,此法是一种定性 试验。可溶性抗原与相应的抗体在琼脂凝 胶中各自向四周扩散,如果抗原和抗体相 对应,则在二者比例适当处形成白色沉淀 线;若抗原和抗体无关就不会出现沉淀线 此试验可以检测抗原或抗体的纯度,滴定 抗体的效价,以及用已知抗原(抗体)检 测和分析未知抗体(抗原)  实验材料 生理盐水、1%琼脂(用于制作琼脂扩散试 验平板) 口知传染性法氏囊病毒抗原、待检血清 打孔器、微量加样器、枪头、酒精灯、搪 瓷盒等  实验步骤 1.制板:称取1g琼脂粉,加入100m生理盐水, 煮沸使之溶解。待溶解的琼脂温度降至60℃左 右时倒入平皿中,厚度为2-3mm。注意勿产生 气泡 2.打孔:待琼脂凝固好后用打孔器打孔,孔径和 孔距依不同疫病检疫规程而定,一般孔径 3~5mm,孔间距4~7mm。孔型多为7孔,中央 1孔,周围6孔(如梅花孔)。用针头挑出孔内 琼脂。 3.封底:将琼脂板无凝胶面在酒精灯火焰上轻轻 灼烧,用手背感受微烫即可。