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精选 养菌 1.保存的菌种在lb培养基(不含amp)上划线 2.37℃培养24h至长出菌落。 3.摇菌 无菌试管内加入7ml LB培养基，挑取单菌落加入培养基中，37℃，200rpm摇菌21-24h 二．感受态细胞 CaCl21．前夜接种受体菌，挑取单菌落于LB培养液中37℃摇床培养过夜（约16小时）；2．取1ml过夜培养物——100ml LB培养液 37℃摇菌2.5-3小时（250-300rpm）；3．将0.1M CaCl2溶液置于冰上预冷；4．1.5ml菌液至1.5ml离心管 冰上冷却10-15分钟；5．4℃下3000 g冷冻离心5分钟；6．弃去上清，加入100μl预冷0.1M CaCl2溶液，用移液枪轻轻上下吸动打匀，使细胞重新悬浮，在冰放置20分钟；7．4℃下3000 g冷冻离心5分钟；8．弃去上清，加入100μl预冷0.1M CaCl2溶液，用移液枪轻轻上下吸动打匀，使细胞重新悬浮；9．细胞悬浮液可立即用于转化实验或添加冷冻保护剂（15% - 20%甘油）后超低温冷冻贮存备用（－70℃）。 转化 （1）加入2ul质粒DNA溶液（含量不超过50ng，体积不超过10μl）+50μl（稀释）感受态细胞 冰浴40分钟 42℃水浴浴锅80秒 冰上冷却2-3分钟。 培养液（不含Amp）650微升 （瓶口灭菌） 摇菌30分钟 200-250转 离