目基因连接转化筛选鉴定.ppt

实验 目的基因的连接转化筛选鉴定 南方医科大学 生物化学与分子生物学实验教学中心 http://sfzx/ 目的 口掌握目的基因的重组连接原理及方法 口理解蓝白斑筛选鉴定的原理 口熟悉重组DNA分子转化受体细胞的基本思 路和方法 实验流程 目的基 转化 蓝白斑筛 选鉴定 连接原理 转化的思 筛选的原理 操作步骤 路及方法 目的基因与载体的连接 原理 DMA聚合酶反应时都有在PCR产物的3末端添加一个或者几 个A碱基的特性 2.利用T载体3末端的T碱基和PCR产物的A碱基互补配对,经 连接酶作用,完成与载体的连接 重组子的转化及筛选鉴定 原理 载体pU0、pGEM系列载体等带有一个来自大肠杆菌DNA 的短序列,其中含有编码β-半乳糖苷酶基因(LacZ基因) 的调控序列科N端146个氨基酸的编码序列,在编码序列中插 入了一个多克隆位点,但不破坏阅读框架,不影响功能。当 这种载体转入的宿主细胞是含有β-半乳糖苷酶c端编码序列 时,此酶的N端序列和端序列可以互补(成为a互补),产 生具有酶活性的蛋白质(β-半乳糖苷酶),从而使宿主细 菌在含有PTG,X-ga的培养基上呈蓝色。