猪肉中克伦特罗的检测_猪肉中的瘦肉精检测整体解决方案.doc

ANAlySIS & TEST 分析与检测 猪肉中克伦特罗的检测 □ 莱伯泰科有限公司 供稿 盐酸克伦特罗是一种β-兴奋剂，猪食用该物质后可在代谢过程中促进体内蛋白质的合成，加速脂肪的转化和分解，从而提高猪肉的瘦肉率，因此其被称为“瘦肉精”。瘦肉精由于使用量大、使用时间长，加之在猪体内代谢慢，所以其在猪体内的残留量很大。如果这些残留的瘦肉精通过食物链进入人体，便可导致人体食物中毒，因此一直被禁用。然而一些养猪户不顾相关部门的规定，在饲料中掺入大量瘦肉精，视人们的食用安全而不顾，严重扰乱了肉类食品市场的秩序，给人们的日常生活带来很大影响。在这种情境之下，如何采用科学快速的方法对猪肉中的瘦肉精进行检测，实现有效监管成为亟待解决的问题。 对于猪肉中克伦特罗的检测而言，样品前处理显得尤为重要。为此，本文介绍了一种快速准确的检测方案，该方案使用LabTech公司全自动固相萃取仪-定量浓缩系统进行样品前处理工作，样品经提取、初步净化后，全自动完成猪肉样品的固相萃取-洗脱液浓缩-溶剂置换过程，最终样品可直接用于液相检测，极大地简化了实验人员的工作步骤，液相色谱检测准确、样品测定平行性好、回收率高。 仪器与试剂 仪器：LabTech Prep Elite-VS全自动固相萃取-定量浓缩仪，LabTech LC600二元梯度高效液相色谱系统； 试剂：乙酸乙酯、10%碳酸钠溶液、0.1mol/L的盐酸溶液、2.5mol/L氢氧化钠溶液、甲醇（色谱级）、4%氨水甲醇、去离子水。 S P E 小柱：Pr o E l u t P X C 90mg/6mL； 活化：依次加入4.5m L 甲醇、4.5mL水和4.5mL、30mmol/L盐酸，对SPE柱进行活化； 上样：将提取液加入小柱中，流出液弃去； 淋洗：依次用4.5mL水和4.5mL甲醇淋洗，氮气吹干10min； 实验方法 样品前处理 1.提取方法：将50g猪肉平均分成10份，准确进行称重。取其中5份加入15mL乙酸乙酯、3mL10%碳酸钠溶液置于50mL离心管中，10000rpm下均质2min，6000rpm下离心2min，将上清液转入另一离心管中。用15mL乙酸乙酯重复提取残渣，合并乙酸乙酯。向乙酸乙酯提取液中加入5mL、0.1mol/L的盐酸溶液，涡旋混合1min，然后在6000rpm下离心1min，收集下层水相。重复萃取一次，合并下层水相，用2.5 mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至5.2。取另外5份，破碎后加入1.0μg/mL克伦特罗标准液1mL，按上述方法进行提取操作，作为加标样品。PrepElite-VS方法设定界面如图1所示。 2.样品净化： 洗脱：7.5mL、4%氨水甲醇洗脱；在线浓缩：50℃下在线浓缩，进行流动相（甲醇：水=35:65）置换，自动定容到1mL。 图1 PrepElite-VS方法设定界面 样品检测 1.液相色谱条件： 食品安全导刊 2011年5月刊 ANAlySIS & TEST 色谱柱：C18柱，250mm×4.6mm，5μm； 流动相：甲醇：水＝35：65；流速：1mL/min；进样量：20μL；紫外检测器：244nm。2.标准品及样品测定 （1）克伦特罗标准溶液的配置：准确称取克伦特罗标准品，用甲醇配成浓度为25μg/mL的标准储备液，用流动相甲醇+水（35:65）将浓度稀释成0.025μg/mL、0. 05μg/mL、0.25μg/mL、1.0μg/mL、2.5μg/mL标准液； （2）将浓缩后的试样采用0.45μm的针筒式微孔过滤膜过滤，滤液待进行液相色谱测定； （3）吸取50μL标准溶液及试样液注入液相色谱仪，进行定性、定量分析。 克伦特罗标准品标准曲线 克伦特罗标准品浓度：0.025μg/m L、0.05μg/mL、0.25μg/mL、1.0μg/mL、2.5μg/mL，线性方程为：Y=361552X-4061.8，线性系数为：R 2=0.9998。如图3所示。 加标样品回收率 加标样品回收率结果见下表1所示，加标样品色谱图如图4所示。 未加标样品检测结果 未加标样品检测结果见图5所示，经计算，未加标样品未检出克伦特罗成分。 克伦特罗标准品（1.0μg/mL）、 理，自动化程度高，可以解决传统固相萃取步骤操作繁琐、溶剂挥发、过柱流速难以控制等问题。同时，收集到的洗脱液可以在线浓缩、溶剂置换、定容过程，极大地简化了繁琐的样品前处理工作，保护操作者免受各种有机溶剂毒害，而且回收率稳定、可靠（回收率高达89.53%）。 未加标样品、加标样品对比色谱图未加标样品、加标样品对图6 克伦特罗标准品、 比图 克伦特罗标准品、未加标样品、加标样品对比色谱图如图6所示。 采用高效液相色谱方法对样品中克伦特罗进行定性、定量检测，方便快速，标准曲线线性系数为R2=0.