现代科技综述知识文库：荧光钙探针试剂.pdf

现代科技综述系列—— 荧荧光光钙钙探探针针试试剂剂 科技是人类区别于动物的重要文明之一， 是人类对自然规律研究 利用的学科。 本文提供对科技基本概念 “荧光钙探针试剂” 的解读，以供大家了解。 荧荧光光钙钙探探针针试试剂剂 细胞 体液中的钙离子调节着许多生物化学反应，例 如酶促反应的激活与抑制，激素的分泌释放，收缩蛋 白运动的控制以及离子通道的开与闭等。 除此以外，细胞内钙也参与疾病的形成与发展。 钙离子起着如此重要的作用自然就提出了怎样标记 无损伤测定钙离子浓度的问题。 目前测定细胞内钙离子浓度有各具特色的不同方法。 80年代荧光钙探针试剂的发现使荧光钙探针试剂法测 定钙的选择性 灵敏度在各种方法中显出特点，而且 可以用无损伤细胞的方法测定细胞内游离钙的浓度， 因此受到普遍重视并进入实用阶段。 无损伤测定细胞内游离钙的浓度困难在于要求有某种 钙探针试剂能够通透细胞膜并在细胞内与钙离子发生 作用，且反应灵敏度足以达到准确测定的要求，以及 10 －3m ／L Mg2+不干扰测定等。 近年来合成的一系列新荧光钙探针试剂的应用使问题 得到了比较满意的解决。 要获得一种选择性好的荧光探针试剂，确定选择性功 能团是重要的一步。 TsienRY等合成 应用的一系列荧光钙探针试剂当中优 选了EGTA为新荧光钙探针试剂的络合功能团。 现在常用的Fura2等荧光钙探针试剂采用EGTA为选择 性功能团是试剂获得成功的重要因素之一。 由于选择性功能团EGTA的确定，使Fura2类似物具有 优良的选择性，为新型荧光钙选择性探针试剂的研究 打下了基础。 EGTA是Ca2+ 的选择性功能团，但是不能成为钙的选择 性荧光探针试剂。 显然这主要是因为荧光强度低以及酸效应太大。 由此可见，保持EGTA功能团结构，引入苯环改变体系 的电子云密度，增加发色团 增大发色分子的共轭体 系是很好的一种方法。 因此人们在BAPTA分子结构中引入荧光很强的芪得到 Fura2类似物，取得重大的研究进展。 Fura2类似物的确在选择性、响应时间，无损伤细胞的 通透方式等方面具有先进性。 然而Fura2等试剂结构中尽管引入了吸电子取代基－ C ，－COOH ，但激发 发射波长红移不多，仍工作 在紫外光区。 为此A ．Minta、J ．P ．Y ．Kao Rr Tsien提出引入荧光 酮 罗丹明类化合物到新型荧光钙试剂结构中，使新 的荧光钙探针试剂工作在可见光谱区域内。 目前以Fluo3受到重视。 为了增大发色分子的截面积，改善发色系统及合成荧 光酮结构的新荧光钙探针试剂，陈震华，喻忠义，尹 权设计并合成了一组新荧光钙探针试剂，其中已合成 的Wuro 4在H+浓度5 ．62×10 －8mol ／L时能穿透鼠肝 细胞进行荧光标记。 选择性钙探针试剂也能改造成显色剂 发光试剂。 喻忠义，陈震华，尹权设计 合成的Wazo类显色剂可 作荧光钙试剂使用，Wazo 1已用于血清中钙含量的测 定，结果令人满意。 S．R ．Adams等从乙撑上进行试剂改进得到Ca2+ 的发 光试剂，其中 itr2被认为是较好的一种。 目前中国已合成Fura2 ，Fura3 Wazo Wuro 4供应用 基础研究。 一般来说，试剂合成反应步骤多，纯度要求高使得荧 光钙探针试剂的合成有相当难度。 因此设计并合成新型荧光钙探针试剂以及研究反应机 理，提高反应产率，减少反应步骤，保证试剂的纯度 自然成为生化试剂工作者注视的目标。 以酸式盐提供的荧光钙探针试剂由于不亲脂，通透细 胞困难。 因此常常将荧光钙探针试剂做成亲脂的乙酰羟甲基酯 以增强其通透细胞的性能，例如常用的Fura2 －AM 等。 在细胞