2016 2017高中生物专题1基因工程11DNA重组技术的基本工具课件新人教版选修3.ppt

专题 1 基因工程 1.1 DNA 重组技术的基本工具 [ 目标导航 ] 1. 了解基因工程的概念。 2. 简述 DNA 重 组技术所需三种工具的来源和作用。 3. 理解基因工程载体 需要具备的条件。 知识梳理 一、基因工程的概念 基因工程的别名 DNA 重组技术 操作环境 生物体外 操作对象 基因 操作水平 DNA 分子水平 结果 新的生物类型和生物产品 二、 DNA 重组技术的基本工具 1 ． 限制性核酸内切酶 —— “分子手术刀” ( 又称限制 酶 ) 。 (1) 来源：主要是从 原核生物 中分离纯化出来的。 (2) 功能： 能够识别双链 DNA 分子的某种特定的核苷 酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间 的 磷酸二酯键 断开，因此具有 专一 性。经限制酶切割产 生的 DNA 片段末端通常有两种形式： 黏性末端 和 平末端 。 前者是限制酶在它识别序列的 中心轴线两侧 将 DNA 的两 条链切开产生的，后者是限制酶在它识别序列的 中心轴 线处 切开产生的。 2 ． DNA 连接酶 —— “分子缝合针”。 (1) 作用： 将 双链 DNA 片段 “缝合”起来， 恢复被限 制酶切开的两个核苷酸之间的 磷酸二酯键 __ ，形成重组 DNA 分子。 (2) 种类。 ① E · coli DNA 连接酶：只能缝合 DNA 片段的 黏性 末端 。 ② T 4 DNA 连接酶： 既可缝合 DNA 片段的黏性末端， 又可缝合 DNA 片段的 平末端 ，但连接后者的效率 低 。 3 ．载体 —— “分子运输车”。 (1) 作用：携带 外源基因 进入受体细胞。 (2) 种类：质粒、 λ 噬菌体 的衍生物、动植物病毒等。 (3) 特点。 ①能够在受体细胞中进行 自我复制 ，或整合到 染色 体 DNA 上，随染色体 DNA 进行同步复制。 ②有一个至多个 限制酶 切割位点，供外源基因插入。 ③具有特殊的 标记基因 ， 供重组 DNA 的鉴定和选择。 预习反馈 判断正误 1 ．通过基因工程产生的变异是不定向的。 ( × ) 2 ．通过基因工程改造成的生物为新物种。 ( × ) 3 ．限制酶和 DNA 解旋酶的作用部位相同。 ( × ) 4 ． DNA 连接酶起作用时不需要模板。 ( √ ) 5 ． 载体 ( 如质粒 ) 和细胞膜中的载体蛋白的成分相同。 ( × ) 6 ．作为载体，必须要有标记基因。 ( √ ) 要点一 基因工程的工具酶 1 ．限制酶的作用位点是？ 2 ．限制酶和 DNA 连接酶有什么不同？ 3 ． DNA 连接酶和 DNA 聚合酶有何区别？ 归纳提升 1 ． DNA 连接酶与限制性核酸内切酶的比较 (1) 区别 比较 作用 应用 限制性 核酸内 切酶 在双链 DNA 分子中使 特定部位的两个相邻核 苷酸之间的磷酸二酯键 断裂 用于提取目的 基因和切割载 体 DNA 连 接酶 在 DNA 片段之间重新 形成磷酸二酯键 用于目的基因 和载体的连接 (2) 两者的关系可表示为 2 ． 限制性核酸内切酶与解旋酶的区别 (1) 相同点：都作用于 DNA 分子。 (2) 不同点：作用部位不同，前者作用于磷酸二酯键， 后者作用于氢键。 3 ． 与 DNA 有关的几种酶 种类 项目 限制酶 DNA 连接酶 DNA 聚合酶 解旋酶 作用 底物 DNA 分 子 DNA 分子片 段 脱氧核苷酸 DNA 分子 作用 部位 磷酸二 酯键 磷酸二酯键 磷酸二酯键 碱基对间 的氢键 作用 结果 形成黏 性末端 或平末 端 形成重组 DNA 分子 形成新的 DNA 形成单链 DNA 分子 4. 上述四种酶的作用部位图解 作用位点示意图 作用于 a( 磷酸二酯键 ) 的酶有限制酶、 DNA 连接酶、 DNA 聚合酶；作用于 b( 氢键 ) 的酶有解旋酶。 限制酶的识别序列和切割末端的判断 (1) 识别序列的特点：呈现碱基互补对称，无论是奇 数个碱基还是偶数个碱基， 都可以找到一条中心轴线， 如 图，中轴线两侧的双链 DNA 上的碱基是反向对称重复排 列的。 (2) 判断黏性末端或平末端是否由同一种限制酶切割 形成的方法是：将黏性末端或平末端之一旋转 180° 后， 看它们是否是完全相同的结构。 典例研析 【典例 1 】 以下几种酶与图中所指的化学键形成或 断裂有关的有几种 ( )