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荧光定量 PCR 技术 生化教研室 研究生实验 一、实验目的 ? 掌握荧光定量 PCR 的原理 ? 熟悉荧光定量 PCR 的操作步骤 ? 了解荧光定量 PCR 的应用 二、实验原理 ? ABI Prism?7500 型荧光定量 PCR 仪 ? 7500 功能一览： ? ? 绝对定量 (Absolute Quantification) ? – 自动计算基线、阈值、 CT 值、浓度、百分 比 ? ? 相对定量 (Relative Quantification) ? ? 等位基因分型 (Allelic Discrimination) ? ? 阴阳性鉴定 (Plus/Minus with IPC) 实时荧光定量 PCR 技术原理 ? 聚合酶链式反应（ PCR ） 可对特定核苷酸 片断进行指数级的扩增，扩增反应结束后， 可通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行定 性分析，也可以通过放射性核素掺入标记 后的光密度扫描来进行定量分析。无论定 性还是定量分析，分析的都是 PCR 终产物。 实时荧光定量 PCR ? 通过对 PCR 扩增反应中每一个循环产物荧 光信号的实时检测从而实现对起始模板定 量及定性的分析。在实时荧光定量 PCR 反 应中，引入一种荧光化学物质，随着 PCR 反应的进行， PCR 反应产物不断累计，