高通量基因测序原理及操作流程培训.pptVIP

原理 流程图 原理 杂交：利用碱基互补原理，通过退火将anchor结合于测序样品末端的已知序列； 连接：随后在T4 ligase的作用下，使与待测位点碱基互补的荧光探针与anchor连接并与样品互补结合； 收集信号：收集与样品结合后的荧光探针在特定激发光下发出的荧光信号，由荧光信号的种类确定样品上所测位点的碱基种类。 Beads 5’ DNA 3’ Beads 5’ DNA 3’ Anchor Anchor Probe Beads 5’ DNA 3’ Anchor Probe 信号收集 确定碱基 荧光 信号 Beads 5’ DNA 3’ Anchor Probe NaOH Cut Beads 5’ DNA 3’ Beads 5’ DNA 3’ New Anchor next cycle 流程图 杂交 退火将anchor结 合于样品末端 连接 T4 ligase的作用使与 待测位点碱基互补的 荧光探针与anchor连 接并与样品互补结合 信号收集 收集与样品结合后 探针在特定激发光 下发出的荧光信号 杂交 2×SSPE 28℃， Wash 60℃，30s Load Anchor 42℃，2min 结合 连接 25℃ 连接 Reaction buffer 25℃， Wash Load： T4 Ligase Probe Reaction buffer 30℃， 10min