实验大肠杆菌感受态细胞制备及转化.pptVIP

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2020-07-17 发布于福建
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实验大肠杆菌感受态细胞制备及转化.ppt

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实验大肠杆菌感受态细胞的制备及转化内容一大肠杆菌感受态细胞的制含实验目的实验原理实验仪器、材料、试剂实验步骤注意事项思考题实验目的 ◇掌握感受态细胞的概念及其意义。 ◆掌握感受态细胞的制备原理与操作方法。实验原理感受态:受体(或者宿主)最易接受外源DNA片段并实现其转化的一种生理状态。它是由受体菌的遗传性状所决定的,同时也受菌龄、外界环境因子的影响。制备感受态的细胞一般选择对数生长期,新鲜幼嫩的细胞是制备感受态细胞和进行成功转化的关键。常用的感受态制备方法包括KCl、CaCl等方法;后者因为操作简便且符合大多数的分子克隆要求,因而被广泛采用实验原理 CaCl2法的基本原理: 细菌处于低温(0℃)和低渗的CaCl2溶液中,菌体膨胀,细胞膜的通透性发生了暂时性的改变,转化混合物中的DNA形成抗 DNase的羟基-钙磷酸复合物黏附于菌体表面,在42℃ 进行短时间的热激处理,促进DNA的吸收。