《DB1362同德老芒麦SSR分子标记鉴定技术规程》.pdf

ICS 65.020.20 B 21 备案号：44861-2015 DB63 青 海 省 地 方 标 准 DB 63/T 1362—2015 同德老芒麦SSR分子标记鉴定技术规程 2015 - 02 - 09发布 2015 - 03 - 15实施 青海省质量技术监督局 发 布 DB63/T 1362—2015 前 言 本规程按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本规程由中国科学院西北高原生物研究所提出并归口。 本规程负责起草单位：中国科学院西北高原生物研究所 本规程主要起草人：窦全文、雷云霆、王海庆、汪新川、喻凤、李媛、赵闫闫、陈志国、刘德梅、 杨文韬。 I DB63/T 1362—2015 同德老芒麦 SSR分子标记鉴定技术规程 1 范围 本规程规定了同德老芒麦SSR分子标记鉴定的设备、试剂配制、操作程序、SSR引物以及判定原则等 技术内容。 本标准适用于种子管理部门、农业科研、教学、生产、农技推广等单位对多年生牧草品种同德老芒 麦真实性及纯度的鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的应用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注明日期的应用文件，其最新版本（包括所有地修改单）适用于本文件。 GB/T 3543.2 农作物种子检验规程 扦样 3 仪器、设备与试剂 仪器、设备与试剂见附录A。 4 试剂配制 4.1 DNA提取试剂 4.1.1 乙二胺四乙酸二钠盐溶液 称取EDTA-Na ·2H O 9.306 g，加去离子水35 mL，剧烈搅拌，用NaOH颗粒0.8 g～1.11 g调pH至8.0， 2 2 定容至50 mL，终浓度为0.5 mol/L。 4.1.2 三羟甲基氨基甲烷盐酸溶液 称取Tris 6.06 g，加超纯水40 mL溶解，滴加浓HCl 1.8 mL～2.2 mL调pH至8.0，定容至50 ml，终 浓度为0.5 mol/L。 4.1.3 DNA提取液 称取十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）8 g，氯化钠32.7 g，三羟甲基氨基甲烷盐酸溶液10 mL，乙二 胺四乙酸二钠盐溶液4 mL，混合，再用去离子水定容至400 mL。 4.1.4 三氯甲烷和异戊醇混合液（24：1） 量取三氯甲烷240 mL和异戊醇10 mL，混匀。 4.1.5 70%乙醇 1 DB63/T 1362—2015 取无水乙醇70 mL加入到30 mL去离子水中，混匀。 4.1.6 10 倍 DNA溶解液 三羟甲基氨基甲烷盐酸溶液10 mL，乙二胺四乙酸二钠盐溶液2 mL，先加入去离子