琼脂糖凝胶电泳技术原理和方法.pptVIP

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2020-07-20 发布于福建
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琼脂糖凝胶电泳技术原理和方法.ppt

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实验三攻脂精凝胶电泳技术的原理和方法主讲教师和实验峰实验目的 ■学习琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理和方法检测碱裂解法提取质粒的结果 ■检测双酶切法鉴定重组质粒的结果(后续实验) 检测PCR法鉴定质粒的结果(后续实验) 二实验原理 (1)某物质在电场作用下的迁移速度叫做电泳的速率,电泳的速率与核酸分子大小和构型有关。 NA分子在碱性缓冲液中带负电荷,在外加电场作用下向正极泳动。分子质量越小跑得越快,紧密构型快于松散型开环分子或线性分子,从而可以分离大小不同的DNA或RNA分子 (2)琼脂糖是一种线性多糖聚合物,可以形成具有刚性的滤孔,凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。浓度越高,孔隙越小,其分辨能力就越强。配制多大浓度的琼脂糖凝胶,要根据被检的DNA分子大小来确定。琼脂糖是一种线性多糖聚合物。浓度越高,孔隙越小,其分辨能力就越强。表1琼脂糖凝胶的浓度与DNA分子大小的关系琼脂糖浓度(% 线塑DNA分子的分离蕊睏(Kb) 5~60 0.8~10 09~6 120 (3)澳化乙锭为扁平状分子,在紫外光照射下发射荧光。EB可与DNA分子形成 EB-DNA复合物,其荧光强度与DNA的含量成正比。据此可判断DNA分子量大小和粗略估计样品DNA浓度。仪器、材料与试剂 1质粒样品、酶切样品和PCR样品。 2凝胶电泳系统和电泳图像分析系统(凝胶成像系统等。 3.琼脂糖、1XTAE电泳缓冲液、 Goldview、6X载样缓冲液(6 Loading buffer)和DNA分子量标准( Marker)