真核细胞RNA提取及电泳分析.pptVIP

真核细廳RNA的提取及电分析 中南大学 生命斛学学院 实验目的 口掌握一种真核细胞RNA的提取方法 口熟悉RNA的琼脂糖凝胶电泳检测分析 实验原理 真核细胞RNA分布于胞质75%、胞核10%、细胞器15% 哺乳动物细胞总RNA: 28S,4700nt 口rRNA80~85% 18s,1900nt 58S,160nt 5S,120nt 口tRNA,10~15%,约5S/70-120nt 口mRNA,1~5%,长短不 实验原理 口 Triz1试剂是由苯酚和异硫氰酸胍等组成的单相、 快速抽提总RN的试剂 口十二烷基肌氨酸钠:破细胞膜及核膜,释放RNA、 DNA和蛋白。 口异硫氰酸胍: RNase抑制剂,抑制内源性 RNase 口苯酚:使蛋白变性。 实验原理 口当加入氯仿时,它可抽提酸性的苯酚,离心后形 成水相层和有机相层。RNA位于水相,而DNA和蛋白 质位于分界层和有机相。 口水相中RNA在高盐和有机溶剂共存时沉淀分离。 口提取的RNA可用于 Northern杂交、mRNA分离、 cDNA合成、RT-PCR。