质粒限制性内切酶反应.pptVIP

实验质粒的限制性内切酶反应分析 分子生物学实验 实验目的 实验原理 实验仪器与试剂 实验步骤 实验结果与讨论 实验目的 心1、掌握限制性内切酶的工作原理,掌握酶 切体系建立原则 2、熟悉基因工程所用的限制酶的特点 实验原理 ◆限制性内切酶能特异地结合于一段被称 为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其 附近的特异位点上,并切割双链DNA。 ◆由于这种切割作用是在DNA分子内部进 行的,故名限制性内切酶(简称限制酶)。 限制性内切酶可分为三类 分子生物学实验 限制性内切 限制作用是 酶分子识别位点切割位点否需用ATP I类 三亚基双功二分非对称至少在识别 能酶 位点外1000 Yes op Ⅱ类内切酶与甲46bp,大多在识别位点 (93%)基化酶分子数为回文对中或靠近识 不在一起称结构 No 别位点无特 异性 Ⅲ类二亚基双功5-7bp非对在识别位点 能酶 称 下游24 Yes 心Ⅱ类限制性内切酶 今分子克隆中常用的为类限制酶,其识别位点 长度为4、5或6个核苷酸的反向重复序列。限 制酶的切割点因酶而异,有些产生带平端的 DNA片段,而另一些产生带有粘性末端的 DNA。如 ECOR I切割识别序列后产生两个互 补的粘性末端: 5… GAATTC3‘→5∵… G AATTC.3 3..5 3. CTTAA G.5