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实验六 细菌的革兰染色 一、实验目的 掌握：细菌涂片的制作方法； 掌握：细菌革兰染色法的原理及操作，识别细菌的革兰染色结果 巩固显微镜油镜的使用方法 二、实验原理 革兰氏染色法之所以能够将细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类，是因为这两类菌的细胞壁结构和成分不同，是细菌学上最常用的鉴别染色方法。 三、实验器材 显微镜、擦镜纸、接种环、酒精灯 香柏油、二甲苯、载玻片、菌种、革兰染液 四、实验步骤 （1）涂片、干燥、固定 （2）初染：加适量结晶紫染色液染色1-2min，水洗 （3）媒染：滴加碘液，媒染1min，水洗 （4）脱色：将玻片倾斜，连续滴加95%乙醇脱色30 s至流出液无色，立即水洗 四、实验步骤 （5）复染：滴加复红复染液复染1min，水洗 （6）干燥：将染好的涂片空气中晾干或者用吸水纸吸干 （7）镜检：镜检时先用低倍，再用油镜观察，并判断菌体的革兰氏染色反应性 操作原则：无菌操作（烧灼灭菌） Aseptic area 10-20cm 外焰 焰芯 内焰 器具：接种环（上）和接种针（下） 柄约22cm 2—5mm 绝缘柄 约7.5cm 金属柄约14.5cm 5—8cm 安装环(针)的螺口(约8mm) 细菌涂片的制备 菌液采取法 细菌涂片的制备 一、细菌涂片的制备 一般制备涂片包括涂片、干燥、固定三步。 涂片 干燥 固定 【操作步骤】 结晶紫 1’ 碘液 1’ 95% 乙醇 30” 复红 1’ 冲洗 滤纸干燥 油镜观察 冲洗 冲洗 冲洗 革兰染液染色 初染 媒染 脱色 复染 【操作步骤】 紫色（G＋） 革兰氏染色步骤示意图 革兰染色 甲菌 乙菌 初染 结晶紫 媒染 碘液 脱色 乙醇 复染 稀释复红 紫色（G＋） 红色（G-） 革兰染色步骤示意图