流式细胞术原理及应用 课件.pptVIP

C 、阳性对照 Positive Control ? 设置阳性对照是为了检测荧光抗体是否有效，并不是每次分析时都 必须设置： ? 使用新的荧光素抗体时； ? 使用存储时间较长的荧光素抗体时。 ? 设置阳性对照的方法： ? 用肯定表达有该抗原的细胞来检测； ? 已经证明有效的、偶联其他荧光素的该抗原的抗体。 31 ppt 课件 ? 什么是荧光补偿？纠正荧光素发射光谱重叠 ? 为什么要进行补偿调节？ 520 400 500 600 700 575 665 FITC PE PC5 laser D 、 单标对照 Single Staining Control 32 ppt 课件 33 ppt 课件 补偿调节方法： FL-1(FITC) F L - 2 ( P E ) FL-1(FITC) F L - 2 ( P E ) FL2 - %FL1 FL-1(FITC) F L - 2 ( - ) FL-1(-) F L - 2 ( P E ) FL1 - %FL2 Before Compensation After Compensation FITC 单标 PE 单标 34 ppt 课件 什么样的补偿最合适？ ? 单染管的阴性群体和阳性群体在所需调节通道的荧光 Median 值相等时 为最合适的补偿。 Uncompensated Compensated FL1-FITC stain F L 2 - n o s t a i n FL1-FITC stain PE-Median neg PE-Median pos PE-Median neg = PE-Median pos PE-Median neg PE-Median pos FL1-FITC stain Overcompensated 35 ppt 课件 准确补偿的重要性 36 ppt 课件 补偿调节要合适 未补偿 正确补偿 FITC-PE 补偿太大 PE-FITC 补偿太大 37 ppt 课件 ? 使用单种荧光素标记的单克隆抗体和其余荧光素对应的同 型对照抗体分别染色 ? n 色分析就要制备 n 个补偿对照管 举例：双染实验 38 ppt 课件 设门与数据分析 ? 门 (Gate ，简写 G) 是流式细胞术中的一个重要术语， FCM 数据分析过 程实际上就是选门和设门的过程。 39 ppt 课件 流式结果 十字门 线性门 40 ppt 课件 黏附因子 表面受体 细胞因子 分泌到胞外的 细胞因子 胞内抗原 核酸含量 核内抗原 细胞功能 ? 细胞表面、胞浆、核的特异 性抗原 ? 细胞活性 ? 细胞内细胞因子 ? 酶活性 ? 细胞受体 ? 细胞内钙离子 流式细胞仪检测范围 41 ppt 课件 ? HIV 免疫分型， CD4 绝对计数 ? 白血病和淋巴瘤的免疫分型 ? 肿瘤的细胞周期和倍体分析 ? 网织红细胞计数 ? 细胞移植的交叉配型和免疫状态监测 ? 干细胞计数 ? 残量白血病细胞检查 ? HLA-B27 检查 ? 血小板功能及相关疾病 医学应用 42 ppt 课件 科研应用 在免疫学研究中的应用 : ? 鉴定免疫细胞类型 ? 抗原特异性 T 细胞研究 ? 细胞因子分泌细胞研究 ? 全血细胞研究 ? 凋亡检测 ? 细胞增殖检测 ? 干细胞向免疫细胞分化的研究 ? 转染荧光蛋白细胞系研究 ? 稀有细胞检测 ? 。。。 在神经生物学研究中的应用： ? 神经干细胞和神经祖细胞的特性 研究； ? 不同类型的神经细胞的鉴定和功 能研究； ? 星形胶质细胞和胶质细胞的鉴定 和功能研究； ? 检测细胞活性，细胞凋亡和细胞 周期； ? 神经细胞发育过程研究 ? 干细胞向神经细胞分化研究 ? 。。。 43 ppt 课件 在肿瘤研究中的应用： ? 细胞凋亡的检测； ? 细胞周期分析； ? 细胞增殖研究； ? 荧光蛋白分析； ? 肿瘤干细胞的鉴定和功能分析； ? 循环肿瘤细胞的鉴定和功能分析； ? 实体瘤细胞的检测分析（肿瘤组织解 离成单细胞后）； ? 肿瘤细胞系表型分析； ? 细胞活性的检测； ? 。。。 在细胞生物学和分子生物学研究中 的应用：