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人外周血循环肿瘤细胞检测试剂盒使用说明书 （免疫磁捕获、免疫细胞化学鉴定） 简介 ： 本 试 剂盒 利 用 免 疫 磁球 捕 获肿 瘤 病 人全 血 中极 少量 的循 环 肿 瘤细胞 （Circulating Tumor Cell ，CTC ），并通过免疫细胞化学鉴定所捕获的细胞，从而 实 现对 CTC 的灵敏检 测。其中免疫 磁球表 面修饰有抗 上皮细胞 粘附分子 （EpCAM ）抗体。免疫细胞化学鉴定是通过异硫氰酸荧光素标记的细胞角蛋白 抗 体 （FITC-anti-CK19 ）、Alexa Fluor 594 标 记 的 抗 白 细 胞 共 同 抗 原 抗 体 （AF594-anti-CD45 ）和 DAPI 对细胞进行免疫荧光染色， DAPI 染色阳性， CK19 表达阳性， CD45 表达阴性（ DAPI+/CK19+/CD45- ）的细胞被鉴定为 CTC 。本试 剂盒对目标细胞的捕获效率高达 90%，简便快速、特异性强、非常可靠， 可以在 3 小时内完成对全血中 CTC 的检测。 试剂盒所含试剂： （10 人份/ 盒） 试剂标号 组分 用途 状态 规格 配制 试剂 A 牛血清白蛋白 封闭 固体粉末 试剂 B 免疫磁球 磁捕获 悬液 200 μL 即用型 试剂 C 4% 多聚甲醛 固定细胞 液体 5 mL 即用型 试剂 D 1%Triton X-100 通透细胞 液体 5 mL 即用型 试剂 E DAPI 细胞染色 液体 50 μL 即用型 试剂 F FITC-anti-CK19 细胞染色 液体 20 μL 即用型 试剂 G AF594-anti-CD45 细胞染色 液体 50 μL 即用型 试剂 H 1×PBS 洗涤 液体 25 mL 即用型 * 保存条件： 4-8℃ 用户自备试剂和材料： 1. 试剂 L：通透封闭液 于 0.05 g 试剂 A 中加入 0.5 mL 试剂 D 溶解待用，或按照此用量比配置所需 用量的通透封闭液，标为“试剂 L ”。 2. 试剂 M ：染色液 于 0.01 g 试剂 A 中加入 190 μL试剂 H 溶解后， 向其中加 5 μL的试剂 E，2 μL 的试剂 F， 5 μL试剂 G，或按照此用量比配置所需用量的染色液， 标为 “试 剂 M ”，4 ℃避光保存待用。 4. 磁力架（推荐 Dynal 公司 123-20D） 5. 移液器 （吉尔森）、涡旋仪、 超声波清洗器、 进口耗材（离心管、 枪头等） 、 恒温水浴摇床、荧光倒置显微镜等。 6. 96 孔板或 PDMS 小槽 检测步骤： 1. 捕获 抽取约 1.5 mL 病人血液于 EDTA 抗凝真空采血管中，将全血样品转移到 2 mL 的离心管内，加入 20 μL试剂 B （试剂B 预先用超声仪超声分散均匀） ， 手摇或涡旋分散均匀后，置于恒温摇床上， 150 rpm ，37℃下孵育 30 min 。 2. 细胞固定 将步骤 1 中的样品置于磁力架上， 吸引约 5 min ，用移液器延外侧轻轻吸出清 液，再用