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备案号 18620-2006 DB36
也
ETJ
省
方
标 准
西
江
DB36/T 485一-2005
猪尿中沙丁服醇的测定-酶联免疫吸附法
2005-12-25 发布 2006-02-01 实施
江西省质量技术监督局发布
DB36/T 485-2005
---
目IJ
E习
本标准由江内省农业厅提出。
本标准起草单位:江山省自药饲料监察所。
;本标准主要起草人:徐国j吉、周伟良、万文根、姜文娟、刘安由、陈文云、胡翔炜。
DB36/T 485-2005
猪尿中沙丁肢醇的测定一酶联免疫吸附法
1 范围
本标准规定了析尿中~yTn安醇酶联免疫吸附测定立法O
本标准适用于挤尿中沙T肢醇残留快边筛选检测。
2 方法原理
测定的某础是抗原抗体反应。做孔板包被有针对沙丁肢醇的兔抗体。经过洗涤步骤后,加入沙丁肢
醇酌标记物、标准或样品溶液。沙丁肢醇与沙T肢醇酌标i己物竞争抗体,没有连接的沙T肢醇酌标记物
在洗涤步骤中被除去。将酌反应底物(过氧化尿素)和显色剂(四甲墓联苯肢)加入到孔中并且孵育。结
合的酌拓、记物将尤色的显色剂转化为蓝色的产物。加入反应停止液后便颜色由监转变为黄色。在450nm
处测量,吸收光强度Lj样品中的沙丁肢醇浓度成反比。
3 试剂与材料
以下试剂除特别注明外均为分析纯,水为蒸t留水。
3. 1 微孔板酶标仪(450nm)
3. 2 离心机(2500rpm 以上)
3. 3 微量加样器(20μL、 50μL、 100 μL、 200μL、 250μ L)
3. 4 酶标板
3. 5 沙 J 肢醇酶标记物
3. 6 沙 J 肢醇标准液(0 、 O. 1 ng/L、 0.3 ng/L、 O. 9 ng/L、 2. 7 ng/L、 8. 1ng/U
3. 7 酶反所底物(含有过氧化尿素)
3. 8 显色剂(四甲基苯肢)
3. 9 磷酸缓冲液(PBS)
3. 10 洗液(PBST)
3. 11 反应停止液(lmo l/L 盐酸)
4 制中羊
取10mL尿样以2500rpm离心10分钟后取上洁部分(洁亮部分)用于检测。若尿样♀浑浊状,需先用滤
纸过滤,再取10mL尿样以2500rpm离心10分钟后取上请部分(清亮部分)用于检测。
5 ;~IJ 定
5. 1 测定之前将所自试剂及{共试样品回温到 200C~250C 。
5. 2 测定程序(200C~250C)
5.2.1 将足够标准和样品所用数量的孔条插入做孔架,标准和样品做两个平行实验,记录下标准和样
品的位置。 1flJ 山孔中的抗休液,用 PBST 液洗涤二次。每次洗板出加入洗液后 2 分钟再倒掉。
5. 2. 2 加入 .50μL 的标准液或处理好的样品液到各扣的微孔中。
5. 2. 3 加入 100μL 稀释的酶标记物到微孔底部, 250C~30oC孵育 30 分钟上。
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