DB36_T 485-2005 猪尿中沙丁胺醇的测定 酶联免疫吸附法(江西省).pdf

备案号 18620-2006 DB36 也 ETJ 省 方 标 准 西 江 DB36/T 485一-2005 猪尿中沙丁服醇的测定-酶联免疫吸附法 2005-12-25 发布 2006-02-01 实施 江西省质量技术监督局发布 DB36/T 485-2005 --- 目IJ E习 本标准由江内省农业厅提出。 本标准起草单位:江山省自药饲料监察所。 ;本标准主要起草人:徐国j吉、周伟良、万文根、姜文娟、刘安由、陈文云、胡翔炜。 DB36/T 485-2005 猪尿中沙丁肢醇的测定一酶联免疫吸附法 1 范围 本标准规定了析尿中~yTn安醇酶联免疫吸附测定立法O 本标准适用于挤尿中沙T肢醇残留快边筛选检测。 2 方法原理 测定的某础是抗原抗体反应。做孔板包被有针对沙丁肢醇的兔抗体。经过洗涤步骤后，加入沙丁肢 醇酌标记物、标准或样品溶液。沙丁肢醇与沙T肢醇酌标i己物竞争抗体，没有连接的沙T肢醇酌标记物 在洗涤步骤中被除去。将酌反应底物(过氧化尿素)和显色剂(四甲墓联苯肢)加入到孔中并且孵育。结 合的酌拓、记物将尤色的显色剂转化为蓝色的产物。加入反应停止液后便颜色由监转变为黄色。在450nm 处测量，吸收光强度Lj样品中的沙丁肢醇浓度成反比。 3 试剂与材料 以下试剂除特别注明外均为分析纯，水为蒸t留水。 3. 1 微孔板酶标仪(450nm) 3. 2 离心机(2500rpm 以上) 3. 3 微量加样器(20μL、 50μL、 100 μL、 200μL、 250μ L) 3. 4 酶标板 3. 5 沙 J 肢醇酶标记物 3. 6 沙 J 肢醇标准液(0 、 O. 1 ng/L、 0.3 ng/L、 O. 9 ng/L、 2. 7 ng/L、 8. 1ng/U 3. 7 酶反所底物(含有过氧化尿素) 3. 8 显色剂(四甲基苯肢) 3. 9 磷酸缓冲液(PBS) 3. 10 洗液(PBST) 3. 11 反应停止液(lmo l/L 盐酸) 4 制中羊 取10mL尿样以2500rpm离心10分钟后取上洁部分(洁亮部分)用于检测。若尿样♀浑浊状，需先用滤 纸过滤，再取10mL尿样以2500rpm离心10分钟后取上请部分(清亮部分)用于检测。 5 ;~IJ 定 5. 1 测定之前将所自试剂及{共试样品回温到 200C~250C 。 5. 2 测定程序(200C~250C) 5.2.1 将足够标准和样品所用数量的孔条插入做孔架，标准和样品做两个平行实验，记录下标准和样 品的位置。 1flJ 山孔中的抗休液，用 PBST 液洗涤二次。每次洗板出加入洗液后 2 分钟再倒掉。 5. 2. 2 加入 .50μL 的标准液或处理好的样品液到各扣的微孔中。 5. 2. 3 加入 100μL 稀释的酶标记物到微孔底部， 250C~30oC孵育 30 分钟上。