第十八章电泳-21讲解学习.ppt

第六节、毛细管电泳（CE）; 2、高效毛细管电泳技术基本原理 最基本的高效毛细管电泳仪器如图1所示： ;样品在毛细管中的分离过程如图2所示：;表1 高效毛细管电泳与高效液相色谱性能比较 ;4、毛细管电泳简单历史;;;二、高效毛细管电泳仪器流程和主要部件 ;1.高压电源; 类型 检测限/mol 特点 紫外-可见 10-13～10-15 加二极管阵列，光谱信息 荧光 10-15～10-17 灵敏度高，样品需衍生 激光诱导荧光 10-18～10-20 灵敏度极高，样品需衍生 电导 10-18～10-19 离子灵敏，需专用的装置;（2）电动进样方式 毛细管一端插入样品瓶，加电压；;三、高效毛细管电泳理论（ theory of HPCE ） （一）高效毛细管电泳(HPCE)基本原理 电泳是指带电离子在电场中的定向移动，不同离子具有不同的迁移速度，当带电离子以速度ν 在电场中移动时，受到大小相等、方向相反的电场推动力和平动摩擦阻力的作用。 淌度μ ：单位电场强度下的平均电泳速度 ?;（二）电渗现象与电渗流(electroosmosis and electroosmotic flow) ;2、HPCE中的电渗现象与电渗流 石英毛细管柱，内充液pH3时，表面电离成-SiO-,管内壁带负电荷，形成双电层。 在高电场的作用下，带正电荷的溶液表面及扩散层向阴极移动，由于这些阳离子实际上是溶剂化的，故将引起柱中的溶液整体向负极移动，速度ν电渗流。 ; 3、HPCE中电渗流的大小与方向 （1）电渗流大小计算公式 电渗流的大小用电渗流速度ν电渗流表示，取决于电渗淌度μ和电场强度E。 即 ν电渗流 = μ E 电渗淌度取决于电泳介质及双电层的Zeta电势，即 μ = ε0εξ ε0—真空介电常数；ε—介电常数；ξ—毛细管壁的Zeta电势（扩散层电势） 。 ν电渗流 = ε0εξ E 实际电泳分析，可在实验测定相应参数后，按下式计算 ν电渗流 = Lef/teo Lef —毛细管有效长度； teo—电渗流标记物（中性物质）的迁移时间。; （2） HPCE中电渗流的方向 电渗流的方向取决于毛细管内表面电荷的性质： 内表面带负电荷，溶液带正电荷，电渗流流向阴极； 内表面带正负电荷，溶液带负电荷，电渗流流向阳极； 石英毛细管；带负电荷，电渗流流向阴极 改变电渗流方向的方法： （1）毛细管改性 表面键合阳离子基团； （2）加电渗流反转剂 内充液中加入大量的阳离子表面活性剂，将使石英毛细管壁带正电荷，溶液表面带负电荷。电渗流流向阳极。 ;4、HPCE中电渗流的流形 电荷均匀分布，整体移动，电渗流的流动为平流，塞式流动（谱带展宽很小）； 液相色谱中的溶液流动为层流，抛物线流型，管壁处流速为零，管中心处的速度为平均速度的2倍（引起谱带展宽较大）。 ;5、HPCE中电渗流的作用;（三）HPCE中影响电渗流的因素 1、电场强度的影响 电渗流速度和电场强度成正比，当毛细管长度一定时，电渗流速度正比于工作电压。 2、毛细管材料的影响 不同材料毛细管的表面电荷特性不同，产生的电渗流大小不同；;3、电解质溶液性质的影响 （1）溶液pH的影响 对于石英毛细管，溶液pH增高时，表面电离多，电荷密度增加，管壁zeta电势增大，电渗流增大，pH=7，达到最大； pH3，完全被氢离子中和，表面电中性，电渗流为零。分析时，采用缓冲溶液来保持pH稳定。 （2）阴离子的影响 在其他条件相同，浓度相同而阴离子不同时，毛细管中的电流有较大差别，产生的焦耳热不同。 缓冲溶液离子强度，影响双电层的厚度、溶液黏度和工作电流，明显影响电渗流大小。缓冲溶液离子强度增加，电渗流下降。