选择性培养基的配制实验报告.docVIP

实验4选择性培养基的配制 【目的】 了解选择性培养基的原理，并掌撮配制选择性培养基的方法和步骤。 【概述】 选择性培养基是一类根据某微生物的特殊营养要求或对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基，具有使混合苗样中的劣势菌变成优势菌的功能，广泛用于菌种筛选等领域。选择性培养基均含有增菌剂和选择剂Y样接种子这类培养基后，由于抑荫剂的选择性抑制作用.使所要分离的目的菌得到较好的繁殖，而其他菌被抑制。经过一定的培养时间后.再将目的菌接种到鉴别培养基上，可以提高目的菌的分离阳性率。抑菌剂的种类很多，如孔雀绿、煌绿、亚硒酸钠、去氧胆酸钠、胆盐、四硫磺酸钠或抗生素等，但加人量需准确，有的可以水溶液无菌配制冷藏备用。以上成分的用量、加人方法均按各类配方进行。 马丁氏培养基常用于从自然环境中分离真菌，培养基中的去氧胆酸钠和链霉素不是微生物的营养成分。由于去氧胆酸钠为表面活性剂，不仅可防止霉菌菌丝蔓延，还可抑制G一细菌生长，而链霉素对多数G一细菌具抑制生长作用，所以它们是用于抑制细菌和放线菌的生长，而对于真菌的生长则没有影响，从而达到分离真菌的目的。 Ashby无氮培养基常用于从自然界环境中分离固氮菌。培养基中只含有基本的碳源和无机盐，没有氮源。一般的细菌不能在此培养基上生长，一些固氮的细菌可以利用空气中的氮气作为氮源，可以在此培养基上生长，从而达到分离固氮菌的目的。 【材料和器皿】 (1)试剂:蛋白胨，葡萄糖，甘露醇，孟加拉红，链霉素，去氧胆酸钠，KH2PO4，MgSO4·7H2O, NaC1，CaSO4·2H2O，CaCO3，琼脂。 (2)器皿:台秤，烧杯，共角烧瓶，量筒，漏斗，试管，玻棒，加压蒸汽灭菌锅等。 (3)其他:药匙，pH试纸，称量纸，记号笔，棉花塞，纱布，线绳，不锈钢试管帽，牛皮纸，报纸等。 【方法和步骤】 1.马丁氏培养基的配制 (l)培养基成分: 葡萄糖 10g 蛋白胨 5g KH2PO4 1g MgSO4·7H2O 0.5g 0.1％孟加拉红溶液 3.3ml 琼脂 16g 蒸馏水 1000ml 自然PH 2％去氧胆酸钠溶液 20ml（预先灭菌，临用前加入） 链霉素溶液(10000U/ml) 3.3ml（临用前加入） (2)配制方法: ①称量:称取培养基各成分的所需量。 ②溶化:在烧杯中加入约2/3所需水量，然后依次逐一加人并溶化培养基各成分，再按每1000ml培养基加人3.3 ml的0.1%孟加拉红溶液。 ③定容:待各成分完全溶化后，补足水量至所需体积。 ④加琼脂:加人所需琼脂量，加热融化，补足失水。 ⑤分装，加塞，包扎。 ⑥加压蒸汽灭菌;12I℃灭菌20min。 ⑦临用前，加热融化培养基，待冷至60℃左右，按每1000ml培养基以无菌操作加入20ml 2%去氧胆酸钠溶液及3. 3ml的链霉素溶液，迅速混匀 2.Ashby氏无氮培养基的配制 (l)培养基成分: 甘露醇 10g KH2PO4 0.2g MgSO4·7H2O 0. NaCl 0.2ml CaSO4·2H2O 0.1g CaCO3 5g 琼脂 15~20g 蒸馏水 1000ml pH 7.2~7.4 (2)配制方法: ①称量:称取培养墓各成分的所需量。 ②溶化:在烧杯中加人约2/3所需水量，依次逐一溶化培养基各成分。 ③定容。 ④调pH至7 .2一7 .4。 ⑤加琼脂:加入所需琼脂量，加热融化，补足失水。 ⑥分装，加塞，包扎。: ⑦加压蒸汽灭菌;121℃(0.07MPa)灭菌20min。 【结果记录】 记录本实验配制培养基的时问、名称和数量。 【注意事项】 1.称药品用的牛角匙不要混用。 2.称完