微生物检测-第三章.ppt

第三章 各类微生物检样的制备 第一节 各类食品检样的制备 一、肉与肉制品检样的制备 1 采样 （1）生肉及脏器： 冷冻或销售：两腿内侧或两侧背肌肉取250g/只 屠宰后的：两腿内侧或两侧背肌肉各150g （2）禽类：整只 （3）各类熟肉制品：200g，熟禽整只 （4）腊肠、香肚等生灌肠：整只、数只(250g） 2 检样处理 （1）鲜肉检样：表面消毒（在沸水内烫3s-5s或灼烧）；无菌剪子剪取深层肌肉25g；放入无菌研钵内剪碎后加入无菌玻璃砂；加入无菌水225mL，混匀（1：10）。或用均质器均质。 （2）鲜、冻家禽检样：表面消毒后，去皮，无菌剪子剪取胸部或腿部肌肉25g。 （3）各类熟肉制品检样：直接剪取或称取25g。 （4）腊肠、香肚等生灌肠：表面消毒后，无菌剪子剪取内容物25g。 如果检测受污染程度时，采用棉拭法，用规板法，10支棉拭擦拭，50cm2，投入50mL水中，作为原液，稀释10倍。检测致病菌，不用规板，直接在可疑部位擦拭。 二、乳与乳制品 1 采样 （1）散装或大包装鲜乳：用灭菌吸管或刀勺取样，每件样品数量不少于200g（mL）。 （2）小型包装乳品：取整件包装 2 检样处理 (1)鲜奶、酸奶:以无菌操作去掉瓶口的纸罩纸盖，瓶口经火焰消毒后,以无菌操作吸取25mL检样，放入装有225mL灭菌生理盐水的三角烧瓶内，振摇均匀（酸乳如有水分析出于表层应先去除）。 (2)炼乳:将瓶或灌先用温水洗净表面，再用点燃酒精棉球消毒瓶或灌的上表面,然后用灭菌的开灌器打开灌（瓶），以无菌操作吸取25mL检样，同上。 (3)奶油:以无菌操作打开包装，取适量检样置于灭菌三角烧瓶内，在45℃水浴或温箱中加温，溶解后立即将烧瓶取出，用灭菌吸管吸取25mL奶油放入另一含25mL灭菌生理盐水或灭菌奶油稀释液的烧瓶内（瓶装稀释液应预置于45℃水浴中保温，作10倍递增稀释时所用的稀释液亦同），振摇均匀，从检样融化到接种完毕的时间不应超过30min。 奶油稀释液:林格氏液（氯化钠9g，氯化钾0.12g，氯化钙0.24g，碳酸氢钠0.2g，蒸馏水1000mL）250mL,蒸馏水750mL,琼脂1g，加热溶解，每瓶分装225mL，121 ℃灭菌15min。 （4）奶粉:用75%的酒精消毒，开封取样25g，放入有玻璃珠的灭菌三角瓶内，将225mL温热的灭菌生理盐水徐徐加入（先用少量生理盐水将奶粉调成糊状，再全部加入，以免奶粉结块）,震摇，充分溶解。 （5）奶酪:用灭菌刀去封蜡，用点燃的酒精棉球消毒表面，然后用灭菌刀切开奶酪，以无菌操作切取表层和深层检样各少许，称取25g置于灭菌乳钵内切碎，加入少量生理盐水研成糊状，或均质，制成1：10稀释液。 三、蛋与蛋制品 1 采样 （1）鲜蛋：用流水冲洗外壳，表面消毒后放入灭菌袋内，加封。 （2）巴氏消毒全蛋粉、蛋黄粉、蛋白片：表面消毒，开盖，用金属制双层旋转式套管采样器斜角插入箱底，使套管旋转收取检样，提出箱外，每个检样不少于100g。装入灭菌广口瓶中，标明后送检。 （3）巴氏消毒冰全蛋、冰蛋黄、冰蛋白：表面消毒，开盖，用灭菌电钻由顶到底斜角钻入取250克，装入灭菌广口瓶中。 （4）成批产品： 巴氏消毒全蛋粉、蛋黄粉、蛋白片等产品以一日或一班生产量为一批检验沙门氏菌时，按每批总量的5%抽样，但每批不得少于3个检样；测定菌落总数和大肠菌群时，每批按装罐过程前、中、后取样3次，每次取样100g，每批合为一个检样。 巴氏消毒冰全蛋、冰蛋黄、冰蛋白按生产批号在灌装时流动取样。 检验沙门氏菌时，冰蛋黄、冰蛋白按250kg取样一件，冰全蛋按500kg取样一件。 测菌落总数和大肠菌群时，每批按装听过程前、中、后取样三次，每次取样100g，每批合为一个检样。 2 检样处理 （1）鲜蛋、糟蛋、皮蛋外壳：用灭菌生理盐水浸湿的棉拭充分擦拭蛋壳，直接放入培养基内增菌培养。也可将整只鲜蛋放入灭菌小烧杯或平皿中，按检样要求加入定量的灭菌生理盐水或液体培养基，用灭菌棉拭充分擦洗后，以擦洗液作为检样。 （2）鲜蛋液：将鲜蛋在流水下冲洗，干后，表面消毒蛋壳，取出蛋白、蛋黄或全蛋液，按比例加入带有玻璃珠的灭菌生理盐水内，摇匀待检。 （3）巴氏消毒全蛋粉、蛋黄粉、蛋白片：检样放入有玻璃珠的灭菌瓶内，按比率加入灭菌生理盐水，充分摇匀。 （4）巴氏消毒冰全蛋、冰蛋黄、冰蛋白：装有冰冻检样的瓶子浸泡于在流动的冷水中融化后取出。 （5）各种蛋制品沙门氏菌增菌培养 无菌操作称取检样，接种于亚硒酸盐煌绿或煌绿肉汤增菌培养基中（有玻璃珠），摇匀后，在37℃温箱中培养20h。 注：亚硒酸盐煌绿增菌培养时，各种蛋及蛋制品的检样接种量均为30g，培养基为150mL;用煌绿肉汤增菌