蛋白质和蛋白质DNA相互作用研究方法加实例.ppt

蛋白质与蛋白质的相互作用研究方法 蛋白质与DNA相互作用研究方法 蛋白质与蛋白质的相互作用的研究方法 酵母双杂交系统 Yeast two- Hybrid Systerm 免疫共沉淀Co- immunoprecipitation(Co-IP 三. GST pull-down技术 四.荧光共振能量转移 Fluorescent Resonant Energy Transfer (FRET) 五.双分子荧光互补( Bimolecular Fluorescent Complement) BIFC 六.蛋白质芯片技术 七.其它方法 一.酵母双杂交系统 1000 900 800 gee 600 目乙 400 100 9091929394959697989900 Fig 1. The number of publication the past 10 years that were found in a search of PubMed using Iwo-hybrid search window. The year 2000 value projected based on the number of references found at the time of the se arch(Septem- ber, 2()0)and the number of remaining ths in the year. 11酵母双杂交技术的原理 酵母双杂交系统由 Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建 他的产生是基于对酵母转录因子GAL4性质的研究 基因转录不仅需要有特定的DNA顺式序列结构,而且也 需要有反式转录激活因子的参与。转录激活因子往往 由两个或两个以上相互独立的结构域构成其中有DN 结合结构域( DNA binding domain,DB)和转录激活结构 域( activation domain,AD),它们都是转录激活因子发挥 功能所必需的。 单独的BD或AD都不能激活基因转录,但不同转录激活 因子的DB和AD形感的奔会蛋白仍然具有正常的激活 转录的功能mmg activation UAS HIS gene 如果要研究两个蛋白之间有无相互作用,可以把这两 个蛋白分别与DB和AD形成的融合蛋白。 与DB融合的蛋白称为“诱饵”(bai), 与AD融合的蛋白称为“猎物”(prey)。 如果这两个蛋白能发生相互作用,这两个融合蛋白上的 DB和AD就能重新形成有活性的转录激活因子,从而激活 报告基因( reporter gene)的转录与表达。 通过检测报告基因的表达产物,可判别“诱饵”和“猎物” 这两个蛋白质之间是否存在相互作用。