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蛋白质浓度测定
(考马斯亮蓝结合法)
、实验目的:
蛋白质是细胞中最重要的含氮生物大分子之一,承担着各种生物
功能。蛋白质的定量分析是蛋白质构造分析的基础,也是农牧产品
品质分析、食品菅养价值比较、生化育种、临床诊断等的重要手段。
根据蛋白质的理化性质,提出多种蛋白质定量方法。考马斯亮蓝G一
250法是比色法与色素法相结合的复合方法,简便快捷,灵敏度高,
稳定性好,是一种较好的常用方法。
通过本实验学习考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的原理,
了解分光光度计的结构、原理和在比色法中的应用。
蛋白质浓度测定方法
凯氏定氮法
2.双缩脲法
3. Folin酚法
4.紫外光吸收法
考马斯亮蓝结合法
6.BCA法
二、实脸原理
考马斯亮蓝G-250是一种染料,在游离状态下呈红色,当它与
蛋白质结合后变为青色。蛋白质含量在5~1004g范围内,蛋白质一色
素结合物在595m下的吸光度与蛋白质含量成正比,故可用比色法
测定。
考马斯亮蓝Gˉ250( Coomassie brilliant blue g-250)测定蛋白质含量属于染料
结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色,最大光吸收在
488nm;当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质-色素结合物在595nm波长
下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比,因此可用于蛋白质的定
量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡,完
成反应十分迅速;其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年 Bradford
建立,试剂配制简单,操作简便快捷,反应非常灵敏,灵敏度比 Lowry法还
高4倍,可测定微克级蛋白质含量,测定蛋白质浓度范围为5~100ug/mL
是一种常用的微量蛋白质快速测定方法
三、要仪器
(1)分析天平、台式天平
(2)具塞刻度试管
(3)吸管
(4)研钵
(5)漏斗
(6)离心机、离心管
(7)容量瓶
(8)微量取样器
(9)分光光度计
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