小麦粉中三聚硫氰酸三钠盐的测定(BJS2020).方法标准.docVIP

附件 1 小麦粉中三聚硫氰酸三钠盐的测定 BJS 202001 1 范围 本方法规定了小麦粉中三聚硫氰酸三钠盐的高效液相色谱测定方法。 本方法适用于小麦粉中三聚硫氰酸三钠盐的测定。 2 原理 样品用甲醇提取，采用高效液相色谱 -二极管阵列检测器测定，外标法定量。试样中检出三聚硫 氰酸三钠盐后采用液相色谱 -质谱 /质谱法进行确证。 3 试剂与试药 除非另有说明，本方法所有试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 3.1 试剂 甲醇（ CH 3OH）：色谱纯。 磷酸二氢钾（ KH 2PO4）。 磷酸（ H 3PO4）。 甲酸铵 （ HCOONH 4）：色谱纯。 甲酸（ HCOOH ）：色谱纯。 3.2 试剂配制 3.2.1 磷酸盐缓冲溶液 （ 20 mmol/L ）：称取磷酸二氢钾 2.72 g（3.1.2 ）（精确至 0.001 g），加水 800mL 完全溶解后，用磷酸（ 3.1.3）调节 pH 在3.7 ±0.2之间，用水稀释至 1000 mL 。 3.2.2 甲酸铵溶液（ 5 mmol/L ）：称取甲酸铵 0.26 g（ 3.1.4）（精确至 0.001 g），加水 800mL 完全溶 解后，用甲酸（ 3.1.5 ）调节 pH在 3.5 ±0.2之间，用水稀释至 1000 mL 。 3.3 标准品 三聚硫氰酸三钠盐：纯度不低于 98%的标准品或经国家认证并发布的有证标准物质。其中文名 称、英文名称、 CAS 号、分子式、相对分子质量、结构式见附录 A 。 3.4 标准溶液配制 3.4.1 标准储备液（ 100 μg/mL ）：准确称取三聚硫氰酸三钠盐标准品 10 mg（精确至 0.01mg），置于 100 mL 容量瓶中， 甲醇溶解并定容， 混匀， 得到浓度为 100 μg/mL 的标准储备液。 -18 oC避光保存 , 有 效期 30天。 3.4.2 标准工作溶液（ 10 μg/mL ）：准确吸取标准储备液（ 3.4.1 ） 5.0 mL 于 50 mL 容量瓶中，用甲醇 稀释至刻度，混匀，得到标准工作溶液。 -18 oC避光保存，有效期 30天。 3.4.3 标准系列工作液：准确吸取标准工作液（ 3.4.2） 0.25 mL 、 0.50 mL 、 1.0 mL 、 2.5 mL 、 5.0 mL 和 10.0 mL 于 50 mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，混匀，得到标准系列工作液。浓度分别为 0.050 μg/mL 、 0.10 g/mLμ 、 0.20 g/mLμ 、 0.50 g/mLμ 、 1.0 g/mLμ 和 2.0 g/mLμ 。现用现配。 4 仪器和设备 高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器。 4.2 电子天平：感量分别为 1 mg 和 0.01 mg。 4.3 涡旋混合器：转速不低于 3000 r/min 。 4.4 高速冷冻离心机：转速不低于 8000 r/min 。 pH计：精确至 0.01。 往复式振荡器。 滤膜：有机相，孔径 0.22 μm。 1 5 分析步骤 样品前处理 5.1.1 试样制备 称取具代表性小麦粉样品约 200 g，混合均匀，贮存于洁净广口容器中，干燥避光保存备用。 5.1.2 试样处理 称取 4 g 试样（精确至 0.001 g），置于 50 mL 具塞离心管中，准确加入甲醇（ 3.1.1） 20 mL ，涡 旋 3 min，振荡提取 10 min ，在 4 oC 下 8000 r/min 离心 2 min，转移上清液至另一离心管中，残渣再 加甲醇 20mL ，重复提取 1 次，合并上清液，涡旋混匀后过 0.22 μm有机相滤膜（ 4.7），弃去 2~5 滴 初滤液，取续滤液作为待测试样液。 5.2 仪器分析参考条件 a）色谱柱： C18色谱柱（ 4.6 mm × 150 mm， 5 μm）或性能相当者。 b）流动相： A 为20 mmol/L KH 2PO4缓冲溶液（ 3.2.1）；B 为甲醇（ 3.1.1 ），梯度洗脱程序见表 1。 c）流 速： 1.0 mL/min 。 d）柱 温： 35 oC。 e）检测波长： 296 nm。 f ）进样量： 10 μL。 三聚硫氰酸三钠盐标准溶液的液相色谱图见附录 B。 表 1 流动相梯度洗脱程序 时间（ min ） A （ %） B （ %） 0.1 70 30 5.0 70 30 5.1 30 70 9.0 30 70 9.1 70 30 15.0 70 30 2 5.3 标准曲线的制作 将标准系列工作液（ 3.4.3）分别注入高效液相色谱仪中，测定相应的峰面积，以标准系列工作 液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。 5.4 试样溶液