生化教研室45教学教案.ppt

生化教研室 肖建英;第一节　DNA的复制 第二节　基因突变 第三节　DNA的修复系统;复制(replication) 是指遗传物质的传代，以母链DNA 为模板合成子链DNA的过程。;概念： DNA生物合成时，母链DNA解开为两股单链，各自作为模板(template)按碱基配对规律，合成与模板互补的子链。子代细胞的DNA，一股单链从亲代完整地接受过来，另一股单链则完全从新合成。两个子细胞的DNA都和亲代DNA碱基序列一致。这种复制方式称为半保留复制。;按半保留复制方式，子代DNA与亲代DNA的碱基序列一致，即子代保留了亲代的全部遗传信息，体现了遗传的保守性。;密度梯度实验 ;A G G T A C T G C C A C T G G;2、复制起点（origin of replication，ori 或 O）;5’;大多数原核和真核生物复制时，DNA都是从固定起始点开始向两个方向解链，形成两个延伸方向相反的复制叉，称为双向复制。;6、复制终点 ;ori;（二）DNA复制的酶系;（1）解螺旋酶(helicase)（DnaB 蛋白）： ——利用ATP供能，作用于氢键，使DNA双链解开成为两条单链 （2）单链DNA结合蛋白(single stranded DNA binding protein, SSB) ——在复制中维持模板处于单链状态并保护单链的完整 E.Coli中的SSB 以四聚体形式存在，与DNA结 合具有协同作用。;10;解链过程中正超螺旋的形成; 拓扑异构酶作用特点 既能水解 、又能连接磷酸二酯键;拓扑异构酶Ⅰ;2、DNA聚合酶;（1）原核细胞中的DNA聚合酶;功能：对复制中的错误进行校读，对复制和修复中出现的空隙进行填补，切除引物。; DNApol Ⅰ利用3′→5′外切活性切除错配的碱基，同时利用5′→3′聚合活性补回正确的核苷酸，这种功能称为即时校读(proof read)。;碱基配对正确，DNApol Ⅰ无活性;5′;323个氨基酸; DNA-pol Ⅱ（120kD）;功能 是原核生物复制延长中真正起催化作用的酶。 ; DNApol Ⅲ分子量为900KD，全酶由10种(α、ε、θ、τ、γ、δ 、δ′、β、κ、ψ)22个亚基构成不对称二聚体； 核心酶包含α、ε、θ亚基； α亚基分别催化领头链与随从链的合成； ε亚基有3′→5′外切酶活性及对碱基的选择功能， θ亚基为装配所必需； β亚基起着夹住模板又能使酶延模板滑动的作用。; DNA-polⅠ DNA-pol??? DNA-polⅢ 分子数/细胞 400 ？ 20 比活性 低于pol Ⅲ ？ 比polⅠ大10倍以上 分子量(kD) 109 120 900 分子组成 单一肽链,有A至R ？ 10种、22个亚基 共18α-螺旋肽段 不对称二聚体 5′→3′聚合活性 ＋ ＋ ＋ 5′→3′外切活性 ＋ － － 3′→5′外切活性 ＋＋ ＋ ＋ 基因突变后致死性 可能 不可能 可能 功 能 校读 不清楚 在复制延长中 填补空隙 修复合成 催化新链合成 切除引物;（2）真核细胞中的DNA聚合酶; 真核生物的DNA聚合酶比较;3、DNA连接酶;DNA连接酶在复制中起最后接合缺口的作用。 在DNA修复、重组及