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附录 3
化妆品防腐效能评价方法操作程序
微生物挑战性实验可采用单一培养或混合培养方式。单一培养即分别接种每种测试菌
株的菌悬液于测试化妆品中, 在接种后的一定时间内对化妆品中的微生物进行平板计数, 以
此判断防腐剂的防腐效能。 混合培养为将几种细菌或真菌的混合液接种于化妆品中, 在接种
后一定时间内, 测定化妆品的菌落数, 以此判断防腐剂的防腐效能。 化妆品防腐效能评价者
可根据实际情况选择培养方式。
微生物挑战性实验测试菌株的选用原则为: 1.包括革兰氏阳性和阴性细菌; 2.酵母菌
和霉菌至少各一种; 3.测试菌株对各种常用防腐剂抵抗性能代表化妆品高危污染微生物对该
防腐剂的抵抗性; 4.可根据化妆品的性质,生产、使用环境等增加菌株。一般较常用的菌株
为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、白假丝酵母菌和巴西曲霉等。
检测时间:一般为在化妆品中加入微生物时(根据加入菌液浓度和化妆品质量 / 体积
计算的理论浓度) ,以及第 1、 7、 14、 21、 28 天检测化妆品中的菌落数。
检测方法:参考《规范》第五章 微生物检验方法。
判定标准:细菌于第 7 天时菌落总数下降 99.9%,至第 28 天时无增长;真菌于第 14
天下降 99.0%,至 28 天时无增长,判断为防腐效果良好。
对于能够保证化妆品产品微生物质量合格,且在使用过程中不存在二次污染的化妆品
可以不进行微生物挑战性实验。
化妆品防腐效能评价方法
1.定义
微生物挑战性实验:将一定量的微生物加入到化妆品中,每隔一定时间检测微生物增减的数量,以此来判断防腐剂防腐效能的实验方法。
2.仪器设备
生物安全柜
高压蒸汽灭菌器
冰箱
恒温培养箱
均质器
天平
3. 试剂和培养基
0.85%生理盐水
含 0.05%吐温 80 的生理盐水
改良的 LETHEEN 肉汤
水解大豆琼脂培养基( TSA)
萨布罗右旋糖琼脂培养基 (SDA)
实验菌株
细菌:金黄色葡萄球菌 ATCC6538,大肠杆菌 ATCC8739,铜绿色假单胞菌 ATCC9027
等。
4.2 真菌:巴西曲霉 ATCC16404,白假丝酵母 ATCC10231等。
根据实际情况可增加其他细菌作为测试菌株。
5. 实验方法(混合培养法)
5.1 样品准备:取包装完好的待测化妆品样品
2 份,在无菌条件下各称取30g
于灭菌
试剂瓶中,备用。
5.2 细菌悬浊液的制备: 使用灭菌生理盐水制备测试菌株的菌悬液,
浓度均为 108cfu/mL 。
取每种测试菌株菌悬液等体积混合,备用。
5.3 真菌悬浊液的制备:使用灭菌生理盐水制备白色假丝酵母菌悬液,使用含
0.05%
吐温 80 的灭菌生理盐水制备巴西曲霉孢子悬液,
浓度均为
108cfu/mL 。取每种测试菌株菌悬
液等体积混合,备用。
5.4 菌液接种及样品检测:取上述称量好的化妆品(
30g),分别加入 0.3mL 混合细菌
悬浊液和 0.3mL 混合真菌悬浊液,用旋涡振荡器混合均匀,将样品于室温(
22.5+2.5℃)保
存。分别于 0、1、7、 14、21、28 天检测化妆品中的菌落数,即取
1g 或 1mL 待测样品加入
到 9mL 改良的 LETHEEN肉汤中,充分混匀稀释成适宜的倍数,检测样品中菌落数。细菌培
养推荐采用 TSA培养基, 36℃± 1℃培养 48h 计数;白色假丝酵母和巴西曲霉培养推荐采用
SDA培养基, 28℃± 2℃培养 3-5 天计数。每次检测做两个平行样。
结果计数:按《规范》中菌落计数方法进行计数。
评价方法
菌落数下降的百分数(
%) = ×100%
( A0
n)
式中:
-A
A
0
A0──为初始加入微生物时化妆品中微生物的含量,单位为
cfu/g 或 cfu/mL ;
A ──为不同检测时间化妆品中微生物的含量,单位为
cfu/g 或 cfu/mL 。
n
根据不同检测时间菌落数下降的百分数评价化妆品的防腐效果。
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