放射免疫技术【通用】.ppt

计算法 自身置换法 比放射活性 单位化学量标记物中所含的放射性强度 单位：Ci/g mCi/mg Ci/mmol 比放射性过高，将影响标记物免疫活性 优选文档 比放射性－计算法 结果欠准，计算简便 依据标记反应中放射性核素的利用率（标记率）来计算标记物的比放射性. 优选文档 比放射性－自身置换法 比较标记抗原与标准抗原的免疫活性来测定标记物的比放射性。 作一条常规的RIA标准曲线，反应体系包括定量标记抗原、不同浓度的非标记标准品抗原、限量抗体；同时另作一条不加非标记标准品、只加抗体和不同剂量的标记抗原的自身置换曲线。 优选文档 自身置换曲线 标准曲线 反应平衡后，测定B/T%。 若从两条曲线上取一点相同的B/T%，则（标记物+标准品）标准曲线=（标记物） 自身置换曲线。由此便可直接计算标记抗原的含量，并进一步求得比放射活性 。 优选文档 自身置换法测定标记化合物的比放射活性，只适用于RIA的标记抗原。使用时应注意： ①标记物与未标记物对抗体（受体）的亲和力 应相同； ②非特异性结合应较小，且计算时应扣除； ③制备标准曲线与自身置换曲线时，操作步骤 应相同，特别是B与F分离的条件要一致。 优选文档 第二节 放射免疫分析 放射免疫分析（RIA）是以放射性核素标记的抗原（Ag*）与未标记抗原（Ag）竞争结合特异抗体（Ab）来对待检样品中的抗原进行定量测定的一种技术。 优选文档 一、检测原理 RIA属于竞争性分析，其基本原理是由于Ag*和Ag（待测物Ag)对特异性抗体具有相同的结合力，当三者同时存在于同一反应体系时，Ag*和Ag相互竞争结合特异性抗体。 Ag*和Ag具有等同的 与Ab结合能力 优选文档 Ab限量，Ag*定量, Ag*和Ag的量大于 Ab结合位点，二者 通过竞争方式与Ab 结合；随着Ag增加，Ag*与Ab结合形成Ag*Ab复合物的放 射量降低,二者变化 成函数关系。 优选文档 (标准Ag/样品Ag) 二、方法与类型 非平衡法，即标准品抗原（或待检样本）和特异性抗体，优先使非标记抗原与特异性抗体达到平衡，然后再加入标记抗原竞争与抗体结合。 两种类型 平衡法，即标记抗原、标准品抗原（或待检样本）、特异性抗体同时加入反应体系中。 优选文档 三、关键技术 抗原抗体反应 分离结合标记物（分离技术） 放射性测定 数据处理 优选文档 Ag* Ag 反应条件 体积 温度 时间 pH Ab (标准Ag/样品Ag) （一）抗原抗体反应 牢固的抗原抗体复合物 优选文档 二抗体沉淀法 PEG 沉淀法 PR 试剂法 活性炭吸附法 分离彻底，迅速 分离试剂和过程不影响反应平衡 效果不受反应介质影响 操作应简单、重复性好 经济 （二）分离结合标记物 优选文档 晶体闪烁计数器 包括了NaI闪烁晶 体、光电倍增管 以及计数器 测量的放射性信 号是仪器输出的 电脉冲数：每分 钟计数(cpm) 参数 cpm B/T (%) F/T (%) B/F (%) B/B0 (%) 注：T即是B与F的总和 （三）数据处理 标准曲线 优选文档 * * * * * * * * * * * * * * * * * 免疫学检验 优选文档 * 第十九章 放射免疫技术 优选文档 * 放射免疫技术的基本概念及类型 放射标记物的鉴定与纯化。 RIA和IRMA的测定原理及关键技术。 RIA和IRMA的临床应用与评价 本章要点 优选文档 目　录 放射性核素和放射性标记物的制备 1 放射免疫分析性 2 免疫放射分析 3 优选文档 * 放射免疫技术是将放射性核素高敏感的示踪特点和抗原抗体反应的高特异性特点相结合的一种体外测定超微量物质的新技术。 其基本模式是应用放射性核素标记抗原或抗体，通过免疫反应进行定量测定。 具有灵敏度高、特异性强、重复性好、样品及试剂用量少、操作简便且易于标准化等优点，在医学检验中得到了广泛应用。 放射免疫技术根据其方法学原理的不同主要有两种类型：RIA和IRMA。 前 言 优选文档 * 第一节 放射性核素和放射性标记物的制备 放射性核素作为放射性免疫技术的标记物，选择何种放射性核素以及如何制备放射标记物（将放射性核素与抗原或抗体连接），是建立放射免疫技术的基础。 优选文档 * 一、放射性核素的基本知识 基本概念　 指在自然条件下可发生自发性的转化，由一种 放射性核素转变成另一种放射性核素，并同时 释放射线（α、β、γ），又称为放射性衰变。 基本类型 依据其衰变方式 α衰变、β衰变、γ衰变 最常用的放射性核素是125I 优选文档 * 125I的优点 化学性质比较活泼，标记