胚胎干细胞介导法.pdf

细胞工程 胚胎干细胞介导法 一、胚胎干细胞介导 胚胎干细胞 （embryonic stem cell，ES）是从胚泡内细胞团分离 得到的多潜能细胞。  将外源基因导入体外培养的ES细胞，经筛选后获得整合稳定和表 现良好的细胞，将这些细胞注射到胚泡腔中，部分ES细胞可与内 细胞团融合并参与其分化，形成嵌合体。  在嵌合过程中，带有外源基因的ES细胞可能进入生殖系，再经杂 交育种得到纯合体，这种纯合体即为所需的转基因动物。  此方法在小鼠上应用比较成熟，大家畜比较困难。 二、胚胎干细胞介导法的过程 获取发育至一定时期的胚胎，经培养后，剥离和分散内细胞团，再培 养，最后分离、扩散、鉴定ES细胞。 通过基因打靶技术，将外源基因经逆转录病毒感染、电脉冲法等方法 导入ES细胞，体外培养和筛选有外源基因表达者。 获取囊胚期胚胎，作为ES细胞的移植受体。 通过显微操作将ES细胞注入到囊胚期胚胎的腔内，使之与内细胞团紧 靠在一起，成为嵌合体。 将注射过的胚胎，经培养后筛选无发育缺损的囊胚，移植到交配第3天 的假孕受体动物子宫内，培育出转基因动物。 胚胎干细胞介导的转基因技术 三、胚胎干细胞介导法的优势  打破了物种的界限，突破了亲缘关系的限制，加快了动物群体遗传变 异程度；  可以进行定向变异和育种,利用同源重组技术对ES细胞进行遗传操作, 通过细胞核移植生产遗传修饰性动物，有可能创造新的物种；  利用ES细胞技术，可在细胞水平对胚胎进行早期选择，这样可以提高 选择的准确性，缩短育种时间。近年来的研究表明，利用ES细胞生产 转基因动物在动物生产中发挥着极为重要的作用。 3种转基因方法及其与受精卵不同发育阶段的关系 DNA 反转录病毒感染或DNA转染或电转移 胚胎干细胞 显微注射 显微注射 Gastrula DNA 反转录病毒感染 DNA 胚胎干细胞介导法外源基因整合率高，植入囊胚前筛选合适的转 化的ES细胞，克服了以前只能在子代选择的缺点，并能充分利用分子 生物学发展起来的各种先进方法，是很有前途的技术。 缺点是不易建立ES细胞系。并且由于通过嵌合体途径，所以实验 周期长。 思考题 1. 胚胎干细胞介导法的操作步骤是什么？ 2. 什么是嵌合体？ 3. 胚胎干细胞介导法有什么优缺点？