完整版植物组织培养学课件5.ppt

? 根、块根、块茎、鳞茎的消毒 ? 由于这些材料生长在地下，带菌量多，一定要 选用未伤害芽眼的根茎做外植体，选好后用软 毛刷边刷边用自来水冲洗，再用吸水纸吸干多 余的水分，切成较长的段或片进行消毒 三、外植体的接种及培养 ㈠ 接种 ? 用镊子、解剖刀对灭菌后的外植体进行适 当整理后，接种到培养基上，接种后瓶、 管用棉塞或封口膜封口，培养皿用无菌胶 带封口 ? 接种器械 ( 解剖刀、镊子等 ) 的消毒方法：将 金属器械蘸入 95% 酒精中，取出后再置于 酒精灯火焰上灼烧，待冷却后即可使用 ( 每 完成一次接种操作后需消毒一次 ) 切取 接种 ? 外植体接种的原则 ? 接种数量 ? 一般材料每瓶 3 ～ 5 个；贵重或稀少的材料， 切勿用大的培养瓶，应用小三角瓶或试管， 每瓶只接种 1 ～ 2 个外植体 ? 如果用大的培养瓶，一般可接种 10 个外植体 , 但只要其中一个发生污染，由于培养基表面 水的流动 , 全瓶外植体都将被污染 ?接种位置 ? 如果一瓶只接种一个外植体 , 就放在培养基 的正中央；接种几个外植体就分布均匀地接 入培养基中 ?接种深度 ? 茎段、茎尖等下端 1/3 左右插入培养基；胚 或种子，胚根朝下插入培养基中 2/3 左右；接 种的叶片，则叶背面接触培养基 ㈡ 外植体的培养 1. 培养方式 ? 固体培养 ? 实验设备要求简单，占有空间少，是普遍的 植物组织培养方法 ? 外植体只有一部分表面可以接触培养基，当 外植体周围的营养被吸收后，容易造成培养 基中营养物质的浓度差异，影响培养物生长 ? 外植体插入培养基的部分，常因气体交换不 畅以及有毒代谢产物的积累而影响组织的呼 吸或造成毒害 固体培养 solid culture ? 液体培养 ? 静置液体培养 ? 加 滤纸桥 ? 振荡液体培养 2. 培养类型 （按培养材料层次） 器 官 培 养 胚 胎 培 养 细 胞 培 养 原生质体培养 组 织 培 养 植 株 培 养 ? 植株培养 指以具备完整植株形态的材料（如幼苗和较 大的植株）作为外植体的无菌培养 ? 器官培养 指以植物的根、茎、叶、花、果实等器官为 外植体的离体无菌培养 ? 组织培养 指以分离出植物各部位的组织（如分生组织、 成熟组织），或已诱导的愈伤组织为外植体 的离体无菌培养 （这是狭义的组织培养） ? 胚胎培养 指以从胚珠中分离出来的成熟或未成熟胚 为外植体的离体无菌培养 ? 细胞培养 由愈伤组织培养而成的悬浮细胞（游离的花 粉粒，分离的卵、精子、细胞、合子等） ? 原生质体培养 指以除去细胞壁的原生质体为外植体的离体 无菌培养 ⑴愈伤组织诱导培养 ? 愈伤组织的形成标志着接种的外植体的生 长状态已脱离分化状态，重新恢复分生能 力，即 脱分化 ⑵继代培养 ? 也称传代培养，指愈伤组织在培养基上生 长一段时间后，营养物枯竭，水分散失， 并已经积累了一些代谢产物，此时需要将 这些组织转移到新的培养基上 3. 培养的基本程序 水稻幼穗 愈伤组织 ⑶分化培养 ? 愈伤组织的 再分化 过程 ⑷生根培养 ? 在生根培养基 (with relatively higher auxin/cytokinin ratios) 上进行根的诱导 ⑸组培苗的炼苗 ? 试管苗在进入自然环境前必须炼苗，进行适 应训练，此步骤也十分关键 ? 打开培养瓶，加入少量蒸馏水，在一定的温 度和湿度条件下炼苗 2 ～ 3 天 ⑹移栽和驯化 ? 炼苗后，洗净试管苗根上的琼脂，将幼苗移 栽至驯化苗圃中驯化。驯化应在能够有效控 制温度、湿度的驯化温室或大棚中进行，每 天定期给幼苗喷施驯化培养液和清水， 15 ～ 20d 驯化大棚 4. 培养条件的控制 ? 光照 ? 温度 ? 湿度 ? 培养基 pH ? 气体调节 光照 ? 光照包括： 时间、强 度和光质； ? 光照时间影响植株再 生状态 ? 光照强度应植物类型 不同而异 ? 光质研究报道较少 温度 ? 常用温度范围一般在 20 ～30℃ ? 低于15℃或高于35℃均会影响培养物的生 长 ? 适宜的温度有利于细胞分裂；适当提高温 度，则有利于细胞伸长；而在一定范围内 降低培养温度，则使细胞的质量增加 ? 组织培养中湿度的影响有两个方面： ? 一是培养容器内的湿度条件，几乎是 100% 的相对湿度 ? 二是环境的相对湿度，一般要求 70 ～ 80% 湿度 第三节 外植体的取材与培养 外植体的取材与培养 第三节 外植体的选择 一 三 外植体灭菌 二 外植体的接种及培养 四 培养中的常见问题及对策 原生质体培养 1. 外植体的概念 ? 外植体（ explant ） ： 用于离体培养的活的植 物组织、器官等材料， 是植物离体培养的基础 材料。（ Ex-plant 离开 植物体的一部分） 一、外植体的选择 ? 生