实验十五、牛乳中酪蛋白的制备.docx

实验十五、牛乳中酪蛋白的制备 1、目的要求 学习从牛乳中分离纯化酪蛋白的原理和方法。 2、实验原理: 牛乳中主要含有酪蛋白和乳清蛋白两种蛋白质。其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。酪蛋白是白色、无味的物质。不溶于水、乙醇及有机溶剂，但溶于碱溶液。牛乳在pH4.7时酪蛋白等电聚沉后剩余的蛋白质统称乳清蛋白。乳清蛋白不同于酪蛋白，其粒子的水合能力强、分散性高，在乳中呈高分子状态。 本法利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。酪蛋白含量约为35g/L。 3、试剂和器材? 一、试剂 95%乙醇；无水乙醚；乙醇—乙醚混合液 (V/V=1∶1) 。 0.2mol/L pH4.7醋酸—醋酸钠缓冲液3000mL： A液：称取NaAc?3H2O 54.44g，定容至2000mL。 B液：称取优级纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g定容至1000mL。 取A液1770mL，B液1230mL混合即得pH4.7的醋酸—醋酸钠缓冲液3000mL。 二、材料 牛奶。 三、器材 离心机，抽滤装置，精密pH试纸或酸度计，电炉，烧杯，温度计。 4、操作方法 1．将25mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入预热至40℃、pH4.7醋酸缓冲液25mL。用精密试纸或酸度计调pH值至4.7。 将上述悬浮液冷却至室温。离心15min(3000r/min)。弃去清液，得酪蛋白粗制品。 2．用水洗沉淀三次，离心10min(3000r/min)，弃去上清液。 3．在沉淀中加入约10mL乙醇，搅拌片刻，将全部的悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2次。最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。 4．将沉淀摊开在表面皿上，风干；得酪蛋白纯品。 5．准确称重，计算酪蛋白含量（g/100mL牛乳）, 并和理论含量为3.5g/100mL牛乳相比较，求出实际得率。 5、思考题 1．制备高产率纯酪蛋白的关键是什么？