原创力文档- 1、本文档共1页，可阅读全部内容。
- 2、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 6、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
农杆菌转化法原理：
农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌，它能在自然条件下趋化性地感染
大多数双子叶植物的受伤部位(受伤处的细胞会分泌大量酚类化合物,从而使农杆菌移向这
些细胞)，并诱导产生冠瘿瘤或发状根。
根癌农杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti 质粒和Ri 质粒，其上有一段T-DNA，
农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T-DNA 插入到植物基因组中,并且可以通过减速
分裂稳定的遗传给后代，这一特性成为农杆菌介导法植物转基因的理论基础。
人们将目的基因插入到经过改造的T-DNA 区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物
细胞的转移与整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株。农杆菌介导法起
初只被用于双子叶植物中，近年来，农杆菌介导转化在一些单子叶植物（尤其是水稻）中
也得到了广泛应用。
农杆菌转化植物细胞涉及一系列复杂的反应，主要包括：①受伤的植物细胞为修复创
伤部位，释放一些糖类、酚类等信号分子。②在信号分子的诱导下，农杆菌向受伤组织集
中，并吸附在细胞表面。③转移DNA 上的毒粒基因被激活并表达，同时形成转移DNA 的
中间体。④转移DNA 进入植物细胞，并整合到植物细胞基因组中。
方法： （根据不同受体环境基因要求而不同）
1． 农杆菌准备
2． 外植体的准备（愈伤组织、悬浮细胞系、幼嫩茎段或叶片）;
3． 用 MS-AS 液体培养基稀释原菌液15 倍（1.5ml / 20ml）或离心后稀释3 倍;
4． 外植体与菌液共培养20 分钟;
5． 放置在带滤纸的培养皿上（注意充分吸干多余的菌液）;
6． 将外植体接种到MS-AS 固体诱导培养基，培养2－3 天 ;
7． 移至含卡那霉素（Kan ）300mg/L 和羧苄青霉素（Cb 300mg/L）的固体筛选培养
基上进行Kan 抗性愈伤组织的筛选;
8． 隔20 天，进行第二次筛选；
9． 抗性愈伤组织在固体筛选培养基上分化成苗；
10 在生根培养基上生根，获得完整的再分化植株。
1
文档评论（0）