关于微生物限度检查验证报告的问题.ppt

05.12.30 1 起草的指导思想 : 完善检查法 . 增加试验的可操作性 . 使方法更具科学性，保证检验结果 的准确性 . 与国际接轨 . 微生物限度检查法 05.12.30 2 ● 验证的目的 : 确认所采用的方法适合 于供试品的微生物限度检查。 ● 验证的意义： 保证检验结果的准确、 可靠及检验方法的完整性。 05.12.30 3 ● 微生物限度检查法验证的必要性 理论、试验结果 ● 验证的内容 准确性 ( 回收率 ) 、专属性 05.12.30 4 验证的类型 ● 前验证 : 建立药品的微生物限度检查法时 . ● 再验证 : 修订的检验方法 ; 供试品的组分或 原检验条件发生改变可能影响检验结果 时 ; 定期的方法验证 . 05.12.30 5 验证用菌株： 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠 菌、黑曲霉、枯草杆菌。 菌株选择的原则 : 代表性 , 普遍性 , 低或非致病性 , 标准 菌株 ( 或该药品中常见的污染菌 ) 。 菌种的要求： 不得超过 5 代。采用适宜的方法保存。 菌液制备 : 50 ～ 100cfu 。 细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证⑴ 05.12.30 6 细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证⑵ 验证方法 试验组 菌液组 稀释剂对照组 供试品对照组 05.12.30 7 细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证⑶ 结果判断： 供试品组的菌回收率、对照组的 菌回收率。 判断标准 : 菌回收率均不低 70% 。 05.12.30 8 控制菌检查 修订特点 : 减少篇幅 不作具体生化试验的规定 增加鉴定方法 适应微生物分类变化要求 增加控制菌检查项 05.12.30 9 控制菌检查法的验证⑴ 试验菌株： 按规定检查的控制菌选择相应验证的菌株。 阴性对照菌株 : 金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、梭菌 用大肠埃希菌；大肠埃希菌、沙门菌、大肠菌群用 金黄色葡萄球菌。 菌种的要求： 不得超过 5 代。采用适宜的方法保存。 菌液制备 : 10 ～ 100cfu 。 05.12.30 10 控制菌检查法的验证⑵ 验证方法： 试验组、阴性菌对照组。 结果判断： 试验组应检出、阴性菌对 照组不得检出。 05.12.30 11 药品微生物限度检查法验证试验结果不 符合要求的处理方法 中和法 培养基稀释法 薄膜过滤法 离心沉淀法 联合方法 05.12.30 12 供试液制备 ● 表面活性剂、中和剂或灭活剂：应证明其有 效性及对微生物的生长和存活无影响。 ● 供试液从制备至加入检验用培养基，不得超 过 1 小时。 ● 供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超 过 45 ℃。 ● 供试液的体积： 100ml 。 非水溶剂供试品增加 : 十四烷酸异丙酯法 05.12.30 13 注意 ● 薄膜过滤法的验证实验中 , 冲洗剂和冲洗量 需验证 . ● 菌液的稀释过程。 ● 霉菌酵母菌温度为 23-28 ℃。 ● 沙门菌的供试品检验量应增加为 10g 及 10mL 。 ● 05.12.30 14 无菌检查法验证 (1) 试验菌株： 金黄色葡萄球菌 . 铜绿假单胞菌 . 白 色念珠菌 . 枯草杆菌 . 黑曲霉 . 生梭胞菌。 菌液制备 : 小于 100cfu 。 供试品： 按规定量取样 .