12基因工程的原理和技术75.pptxVIP

第二节 基因工程的原理和技术;基因工程的原理： 基因重组 基因工程的目标： 让人们感兴趣的基因在宿主细胞中稳定和高效表达。;基因工程的基本操作步骤：;步骤1：获得目的基因;获得目的基因的方法：;1）人工合成;2）聚合酶链式反应即PCR技术;氢键断裂，形成单链DNA。;基因文库：用重组DNA技术将某种生物细胞的总DNA或染色体DNA的所有片断随机地连接到基因载体上，然后转移到适当的宿主细胞中，通过细胞增殖而构成各个片段的无性繁殖系(克隆)，在制备的克隆数目多到可以把某种生物的全部基因都包含在内的情况下，这一组克隆的总体就被称为某种生物的基因文库。同一定义也适用于某种生物的线粒体DNA或叶绿体DNA的基因文库。 　;3）从基因文库中获取目的基因：;;;步骤2、重组DNA分子的形成：;GAATTCCGTAGAATTCGGATT ;思考： 目的基因、运载体质粒经DNA连接酶处理，可能有几种产物？;(08海南) 图为某种质粒表达载体 简图，小箭头所指分别为限制性 内切酶EcoRI、BamHI的酶切位 点，ampR为青霉素抗性基因， tctR为四环素抗性基因，P为启 动因子，T为终止子，ori为复制 原点。已知目的基因的两端分别 有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。 （1）将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoRI酶切，酶切产物用DNA