葛根素通过抑制自噬对缺氧诱导的PASMCs增殖的影响.pdf

摘要 摘 要 肺动脉高压（Pulmonary arterial hypertension ，PAH ）的定义是在低压肺循环系统内 平均肺动脉压升高至≥25mmHg 。其病因复杂，分类繁多。如果不及时诊断和治疗，将 导致右心衰竭，预后不良。葛根素是从葛根中提取的天然类黄酮，它具有许多生物活 性，例如抗肿瘤、抗炎、抗氧化和抗血管生成等特性，葛根素已被广泛用于治疗心脑血 管疾病和糖尿病。然而，葛根素如何在肺动脉高压中介导自噬仍然未知。本试验以大鼠 和大鼠肺动脉平滑肌细胞 （Pulmonary artery smooth muscle cells ，PASMCs ）为研究对 象，探索葛根素是否通过抑制自噬而对缺氧性肺动脉高压大鼠发挥预防保护作用，进一 步揭示葛根素对缺氧诱导的 PAH 的保护作用机制提供理论依据。为了探讨葛根素在缺 氧诱导的 PAH 中的保护作用以及如何影响自噬水平，本研究通过缺氧诱导建立 PAH 大 鼠模型，给予葛根素药物和等剂量的 0.5%羧甲基纤维素钠溶媒灌胃 21 天。采用多普勒 超声仪测量大鼠的肺动脉血流加速时间（Pulmonary artery acceleration time ，PAAT ）、肺 动脉速度时间积数（Pulmonary artery velocity time integral，PAVTI ）、舒张末期右室前壁 厚度（Right ventricular anterior wall;diastole ，RVAW ；d ）、收缩末期右室前壁厚度 （Right ventricular anterior wall;systole，RVAW ；s ）。右心导管法连续记录右心室收缩压 （Right ventricular systolic pressure ，RVSP ），测量完成后用右心室/ （左心室+室间隔） 重量的比值表示右心室肥厚的程度。HE 染色法和免疫组织化学观察肺动脉组织的病理 形态学变化。免疫组织化学法检测肺动脉组织自噬相关蛋白 LC3B-II 、BECN-1 的表达 情况，蛋白免疫印迹检测肺组织中肺动脉血管 LC3B-II 、BECN-1、ATG5 和 SQSTM1 表达水平。通过免疫荧光分析检测LC3B-II 在PASMCs 中的表达，并用Bafilomycin A1 检测自噬通量。通过用自噬双标记腺病毒（Ad-mRFP-GFP-LC3 ）转染 PASMCs 来监测 自噬流量。结果表明，葛根素可以在体内和体外下调自噬相关蛋白的表达。为了进一步 研究葛根素是否以自噬依赖性方式抑制低氧诱导的PASMCs 异常增殖，在给予葛根素的 基础上加以自噬抑制剂 Bafilomycin A1 进行干预，采用 CCK-8 法检测细胞的增殖水 平。用蛋白质印迹法检测细胞中PCNA 、Cyclin A、Cyclin D1 和Cyclin E 的表达水平。 结果表明，自噬抑制剂Bafilomycin A1 与葛根素具有相似的作用，进一步证明了葛根素 可能是通过抑制自噬减少缺氧诱导的PASMCs 异常增殖。总之，我们揭示了葛根素的预 防作用是显著的，并且葛根素的自噬抑制作用显著消除了缺氧诱导的血管重塑的作用。 就我们所知，该研究首次发现葛根素通过抑制自噬减少缺氧诱导的 PASMCs 的异常增 殖，并阻止PAH 的发展，为PAH 的治疗提供了新的药物平台和治疗策略。 关键词 葛根素；低氧；肺动脉高压；自噬；增殖 - I - 哈尔滨商业大学硕士学位论文 Abstract Pulmonary arterial hypertension (PAH