沙门氏菌检验详细流程.pptxVIP

GB 4789.4-2010食品安全国家标准食品微生物学检验 沙门氏菌检验;沙门菌概况;沙门菌的分类;沙门菌种和亚种的鉴别;沙门氏菌的血清分型;沙门氏菌命名与书写方式;检样;目的：修复损伤的细菌细胞； 方法：25 g（mL）样品＋225 mL BPW的无菌均质杯中，以8 000 r/min～10 000 r/min均质1 min～2 min，或置于盛有225 mL BPW的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min。若样品为液态， 不需要均质，振荡混匀。 如使用均质袋，可直接 进行培养。于36 ℃±1 ℃ 培养8 h～18h。 ;无菌均质袋;轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1 mL, 转种于10 mL TTB 内, 于42 ±1 ℃培养18 ～24 h。同时, 另取1 mL, 转种于10 mL SC内, 于36 ±1 ℃培养18 ～24 h。 分别用接种环取增菌液1环, 划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板（或HE琼脂平板或显色培养基平板）。于36 ±1 ℃分别培养18 ～24 h (XLD琼脂平板、HE琼脂平板、显色培养基平板) 或40 h～48 h (BS琼脂平板)，观察各个平板上生长的菌落。 为了最大可能的检出沙门氏菌，原则上必须使用两种以上选择性分离培养基。 ;分离培养基回收率测定（%）;典型菌落--BS;典型菌落--HE;典型菌落--XLD;初筛微生物;生化试验 ;穿刺TSI方法;接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时，可直接接种蛋白胨水 (供做靛基质试验)、尿素琼脂 (pH7.2)、氰化钾 (KCN) 培养基，也可在初步判断结果后从营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种。于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h, 必要时可延长至48 h。 将已挑菌落的平板储存于2 ℃～5 ℃或室温至少保留24 h，以备必要时复查。 ;沙门氏菌属的三糖铁和赖氨酸脱羧酶试验结果 ;TSI的反应 赖氨酸脱羧酶试验;沙门氏菌属生化反应初步鉴别表 ;沙门氏菌属生化反应初步鉴别表 ;沙门氏菌属各生化群的鉴别必要时按此表进行沙门菌生化群鉴定 ;沙门菌的其他鉴定;沙门菌的血清学鉴定;血清学鉴定时的注意要点： 做血清凝集时，同时应用生理盐水做对照。 O血清不凝集时，可将菌株转接于琼脂量较高(如2.5%-3%)的斜面上，再做凝集。 如果由于Vi抗原的存在而阻止了O抗原的凝集反应时，应挑取菌苔于1mL生理盐水中做成菌悬液。煮沸后再检查。(常见于伤寒???门菌)。 有极少数的二相沙门菌会同时出现2相H抗原，也有一些沙门氏菌在培养过程中H抗原会出现第1项和第2项之间的转变，所以血清诱导实验要用新鲜的培养物进行诱导。;