昆明医学院分子生物学实验的设计电子教案.pptVIP

实验原理 正常红细胞的G6PD能使6磷酸葡萄糖转变为6磷酸葡萄糖酸，同时又能使其辅酶尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP+)还原为还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)，高铁血红蛋白在NADPH供氢条件下还原成还原血红蛋白。氧化型亚甲基蓝可作为递氢体加速磷酸戊糖旁路代谢中此种作用的速度，当G6PD缺乏时，在递氢体亚甲基蓝加速磷酸戊糖旁路的条件下，高铁血红蛋白还原速度显著降低，因此，可根据高铁血红蛋白还原的速度来了解红细胞有无G6PD缺乏。 G6PD的缺陷不能提供足够的NADPH以维持还原型谷胱甘肽（GSH）的还原性（抗氧化作用），在遇到蚕豆中某种因子后更诱发了红细胞膜被氧化，红细胞膜上的磷脂分子中的不饱和脂肪酸氧化生成过氧化脂质，损害细胞膜。 G-6-PD有保护正常红细胞免遭氧化破坏的作用，新鲜蚕豆是很强的氧化剂，当G-6-PD缺乏时则红细胞被破坏而致病。 亚甲基蓝与血红蛋白结合能力强 亚硝酸钠能使血红蛋白变成高铁血红蛋白 高铁血红蛋白还原试验意义 当红细胞G-6-PD活性正常时，还原率75%；如G-6-PD缺陷，形成高铁血红蛋白，还原速度远较正常红细胞慢，还原率显著降低。 实验试剂 高铁血红蛋白还原试验法试剂?(自制，有效期内使用)：0．18 mo]／1 亚硝酸钠一0．28 mol／I 葡萄糖溶液(亚硝酸钠1．25 g，葡萄糖5．o g，加蒸馏水至100