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专题1基因工程 2、DNA连接酶 来源 粘性末端 粘性末端和平末端 E?coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 与DNA聚合酶、热稳定DNA聚合酶有什么异同？ 3、载体 种类： 条件： 质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等 ①能在细胞中稳定存在并复制 ②1―多个限制酶切位点 ③标记基因 ④无害 组成： 目的基因、标记基因 启动子、终止子 三、过程 1、获取目的基因 从基因文库中获取目的基因 PCR技术扩增 人工合成 序列、功能、位置、转录产物mRNA、表达产物蛋白质等 如何利用PCR技术扩增目的基因？ 条件： 缓冲液 模板 两种引物 热稳定DNA聚合酶 4种脱氧核苷酸 过程： 变性： 复性： 延伸： 加热至90―95℃ 冷却至55―60℃ 加热至70―75℃ 2、构建基因表达载体（核心） 3、将目的基因导入受体细胞 植物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 双子叶植物和裸子植物 单子叶植物 我国独创 动物细胞 显微注射法（受精卵） 微生物细胞 Ca 2+ 处理法 4、目的基因的检测与鉴定 ①分子水平 ②个体水平 DNA分子杂交技术 抗原―抗体杂交技术 DNA 、mRNA 四、应用 植物 动物 基因治疗： 抗性植物（抗虫、病、逆性等） 改良品质（番茄延熟、提高营养、控制花色等） 改善品质（提高生长速率、营养成分等） 生产药物（乳腺生物反应