微生物发酵制药技术 5-3生产工艺过程 5-3.pptVIP

项目3 生产工艺过程 甾体的微生物转化和一般的氨基酸、抗生素的生产不同，发酵的产物不是目的产物，而只是利用微生物的酶对甾体底物的某一部位进行特定的化学反应来获得一定的产物。 整个生产过程，微生物的生长和甾体的转化完全可以分开。 一般先进行菌的培养，在菌生长过程中累积甾体转化所需要的酶，然后利用这些酶来改造分子的某一部位。 为了获得较多的酶，首先需保证菌体的充分生长，但微生物的生长与酶的生产条件不是完全一致的。 一、甾类激素生产的原料 早期合成甾类激素的起始原料大多来自动物的胆甾醇、胆酸等。因这些原料的来源少、含量低、成本高，不能满足生产的需要。因而促使从植物中寻找起始原料并获得成功。 已经大量投产的甾类原料：胆固醇、胆酸、薯蓣皂苷配基（穿龙薯蓣和盾叶薯蓣）、豆甾醇、澳洲茄碱等。 二、甾类激素的微生物转化生产流程 甾体的微生物转化通常分两个阶段： 第一阶段是生长阶段；第二阶段是转化阶段 大多数甾体化合物难溶于水，通常是先把底物溶于有机溶剂，如丙酮、乙醇、甲醇，浓度在 2％时对微生物无毒性。或用表面活性剂(如吐温80)来提高基质溶解度。 甾体氧化需要较大的通气量，一般1：0.8(vvm)。 甾体加入的速度随菌种转化能力和基质的性质而定，一般浓度约200～800mg／L，采用基质的定期加入和连续加入的办法来解决基质或产物的毒性问题。 转化时间随菌种而异，一般范围在12～72h。 转化后的产物大多不溶于水，所以采用溶剂萃取法进行提取。 如果产物分泌在发酵液中，则发酵滤液采用离子交换树脂吸附法吸附甾体化合物，洗脱后，减压浓缩进行结晶。 二、甾体微生物转化方式 进行微生物转化反应可以利用不同形式的微生物细胞，如菌体培养物、静止细胞悬液、孢子悬液、混合培养物、固定化细胞或固定化酶等。 静态菌体悬液 优点：能自由地改变反应液中的基质和菌体量的比例，与生长培养法相比一般能缩短反应时间，在转化生长物中杂质较少，分离提纯比较容易等。 混合培养 混合培养进行反应是将具有1，2脱氢能力和11β羟化能力的微生物并用进行转化反应。可省略抽提操作。 三、 氢化可的松的制备 氢化可的松又称为皮质醇。化学名称为11β，17a，21一三羟基孕甾-4烯-1，20-二酮。其结构式为： 氢化可的松为皮质激素类药物，具有影响糖代谢、抗炎、抗毒、抗休克及抗过敏等作用。主要用于肾上腺皮质功能不足和自体免疫性疾病；应用于某些感染的综合治疗。 消化性溃疡病、骨质疏松症、精神病、重症高血压患者忌用，充血性心力衰竭、糖尿病、急性感染病慎用。由于氢化可的松疗效确切，为重要的甾体激素类药物之一，在国内生产的激素类药物中产量最大。 1．反应原理 2．工艺过程 将犁头霉菌接种到土豆斜面培养基，28℃培养7～9天，成熟孢子用无菌生理盐水制成孢子悬液后。种子培养基用葡萄糖、玉米浆、硫酸铵等配制，pH值为5．8～6．3，接入孢子悬液后，在通气搅拌下28 ℃培养28～32h。待培养液菌浓度达到35％以上，无杂菌污染，即可转入发酵罐。 将玉米浆、酵母膏、硫酸铵、葡萄糖及水投入发酵罐中搅拌，用NaOH调整物料pH值到5.7～6.3，加入O.03％豆油，灭菌温度120℃ ，通入无菌空气，降温至27～28℃ ，接入犁头霉孢子悬浮液，通气搅拌发酵28～32h。 用NaOH调pH值到5.5～6.0，投入发酵液体积0.15％的莱氏化合物S，氧化48h后，取样做比色试验检查反应终点。 到达终点后滤除菌丝，滤液用树脂吸附，然后用乙醇洗脱，洗脱液经减压浓缩至适量，冷却到0～10 ℃，过滤、干燥得到粗品，收率46％左右。 以上所得粗品中主要为β体，并混有部分α体，必须进行分离精制。可以将粗品加入16～18倍含8％甲醇的二氯乙烷溶液中，加热回流，趁热过滤，滤液冷却至O～5℃，冷冻、结晶、过滤、干燥得氢化可的松。 * H?gskolan i Bor?s Mohammad Taherzadeh 《微生物发酵制药技术》 学习情境5 微生物转化发酵制药技术 《微生物发酵制药技术》 《微生物发酵制药技术》 《微生物发酵制药技术》 《微生物发酵制药技术》 《微生物发酵制药技术》 《微生物发酵制药技术》 《微生物发酵制药技术》 《微生物发酵制药技术》 《微生物发酵制药技术》 《微生物发酵制药技术》 《微生物发酵制药技术》 《微生物发酵制药技术》 《微生物发酵制药技术》 《微生物发酵制药技术》 《微生物发酵制药技术》 《微生物发酵制药技术》 《微生物发酵制药技术》 * * * *