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微生物的生长曲线 —— 汤俊华 一 微生物生长曲线 二 生长曲线的四个时期 三 生长曲线各个时期的特点 四 测定细菌生长曲线 四 生产应用 微生物 生长曲线 是以微生物数量（活 细菌个数或细菌重量）为纵坐标，培 养时间为横坐标画得的曲线。一般说， 微生物（细菌）重量的变化比个数的 变化更能在本质上反应出生长的过程。 曲线可分为三个阶段即生长率上升阶 段（对数生长阶段）、生长率下降阶 段及内源呼吸阶段。 微生物典型生长曲线分为延滞期（适应期）、指数期、稳定期和衰亡期 停滞期： （ 1 ）细胞物质开始增加； （ 2 ）有的细胞开始不适应环境而死亡； （ 3 ）细菌总数下降； （ 4 ）停滞期末期，细胞代谢活动能力强，细胞 中 RNA 含量高，嗜碱性强。对不良环境条件较敏感， 呼吸速度、核酸及蛋白质的合成速度接近对数细胞， 并开始细胞分裂。 成因 微生物刚刚接种到培养基之上，其代谢系 统需要适应新的环境，同时要合成酶、辅酶、其他 代谢中间代谢产物等，所以此时期的细胞数目没有 增加。 对数期 ： （ 1 ）菌体以几何数增加，增长速度快； （ 2 ）细胞代谢能力最强； （ 3 ）细菌很少死亡或不死亡。 成因 经过调整期的准备，为此时期的微生物生 长提供了足够的物质基础，同时外界环境也是最佳 状态。 稳定期： （ 1 ）生长速率下降，死亡率上升； （ 2 ）细胞数达到最大值，新生的细菌数和死亡 的细菌数相当。 成因 营养的消耗使营养物比例失调、有害代谢 产物积累、 PH 值 EH 值等理化条件不适宜 衰亡期： （ 1 ）死亡率增加，细菌少繁殖或不繁殖； （ 2 ）细菌常出现多形态、畸形或衰退型，有的 会产生芽孢 成因 主要是外界环境对继续生长越来越不利、 细胞的分解代谢大于合成代谢、继而导致大量细菌 死亡。 测定细菌生长曲线 实验目的 了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖 的代时； 学习液体培养基的配制以及接种方法； 反复练习无菌操作技术； 了解不同细菌，不同接种方法在同一培 养基上生长速度的不同； 掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌 生长的方法 实验原理 将一定量的细菌接种在液体培养基内，在一定条件下培养， 可观察到细菌的生长繁殖有一定的规律性，如以细菌的活 菌数的对数作纵坐标，以培养时间作横坐标，可绘成一条 曲线，成为生长曲线（如图一）。 单细胞微生物的发酵具有四个阶段，即 Ⅰ 调整期（延滞期）、 Ⅱ 对数期（生长旺盛期）、 Ⅲ 平衡期（稳定期）、 Ⅳ 死亡期 （衰亡期）。 生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程的动态。不同 的微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件 下，其生长曲线也不一样。因此，测定微生物的生长曲线对于 了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。 测定微生物生长曲线的方法很多，有血球计数板法、平板菌落 计数法、称重法和比浊法等。本实验采用比浊法测定，由于细 菌悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可利用分光光度计测定 细菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。将所测得的光密度值 （ OD600 ）与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定 条件下的生长曲线。注意，由于光密度表示的是培养液中的总 菌数，包括活菌与死菌，因此所测定的生长曲线的衰亡期不明 显。 从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的 时间，即代时，以 G 表示。其计算公式为： 式中 t1 和 t2 为所取对数期两点的时间； W1 和 W2 分别为相应时间测得的细胞含量（ g/L ）或 OD 。 2 lg / ) lg (lg 1 2 1 2 W W t t G ? ? ? 实验仪器、材料和用具 实验材料 : 大肠杆菌，枯草杆菌菌液及平 板； 培养基 : 牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基 实验仪器 : 取液器 (5000ul, 1000ul 各一支 ); 培养箱 , 摇床， 722s 分光光度计； 实验用具 : 无菌 1000ul 吸头 80 个 ; 无菌 5000ul 吸头 2 个 ; 比色皿 9 个 + 共用参比杯 一个 . 实验步骤 准备菌种：将细菌接种到牛肉膏蛋白胨葡萄糖三角瓶培养基中， 37 ℃ 振荡培养 18h ，另外准备单菌落平板各 1 块 分为三个小组： 第（ 1 ）小组 取 1.0ml 大肠杆菌菌液接种到 100ml 培养基 , 37 ℃ 200rpm 取 3.0ml 大肠杆菌菌液接种到 100ml 培养基， 37 ℃ 200rpm 取 5.0ml 大肠杆菌菌液接种到 100ml 培养基， 37 ℃ 200rpm 第（ 2 ）小组 取一个大肠杆菌菌落接种到 100ml 培养基， 37 ℃ 200rpm 取 1.0ml 大肠杆菌菌液接种到 100ml 培养基， 37 ℃ 110rpm 取 1.0ml 大肠杆菌接种到 100ml