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ICS 11.220
B 41
团 体 标 准
T/CVMA X18—2020
猫星状病毒RT-PCR 检测方法
Detection of feline astrovirus by RT-PCR method
中国兽医协会 发 布
T/CVMA X18—2020
前 言
1
T/CVMA X18—2020
猫星状病毒RT-PCR 检测方法
1 范围
本标准规定了猫星状病毒RT-PCR检测方法的缩略语、材料、操作步骤和结果判定。
本标准适用于猫的星状病毒的实验室诊断。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。
3 缩略语
下列缩略语适用于本文件。
RT-PCR:逆转录-聚合酶链反应(Reverse transcrition-polymerase chain reation)。
RNA:核糖核酸(Ribonucleic acid)。
DNA:脱氧核糖核酸(DeoxyriboNucleic acid)。
cDNA:互补脱氧核糖核酸(complementary DNA)。
PBS:磷酸缓冲盐溶液 (phosphate buffer saline)
4 材料
4.1 仪器设备
4.1.1 -20℃冰箱
4.1.2 高压蒸汽灭菌器
4.1.3 干热箱
4.1.4 恒温水浴锅
4.1.5 分析天平,感量0.1mg
4.1.6 高速冷冻离心机,12 000r/min 以上
4.1.7 旋涡振荡器、
4.1.8 PCR 扩增仪
4.1.9 核酸电泳仪
4.1.10 凝胶成像系统
4.2 耗材与器械
4.2.1 1.5ml 离心管。
4.2.2 医用棉签
2
T/CVMA X18—2020
4.2.3 0.22µm 过滤器。
4.2.4 枪头,10µL,200µL,1 000µL。
4.2.5 移液器,0.1-2.5µL, 0.5-10µL, 1-100µL, 100-1000µL。
4.3 试剂
4.3.1 RNA 提取试剂盒。
4.3.2 反转录试剂盒。
4.3.3 Taq DNA 聚合酶。
4.3.4 灭菌双蒸水,实验用水应符合GB/T 6682 中一级水的要求。
4.3.5 PBS 缓冲液 (pH7.4,含青霉素100U/mL、链霉素0.1mg/mL)。
4.3.6 琼脂糖 (分析纯)。
4.3.7 DNA 电泳缓冲液。
4.3.8 Goldview 核酸染料。
4.4 引物
4.4.1 试验中所用引物见表1。
表1 引物序列和片段大小
引物名称 引物序列5--3 片段大小
FeAstV-F GAAATGGATTGGACACGYTAYGA 419bp
FeAstV-R GGCTTGACCCACATRCCGAA
5 操作步骤
5.1 采样器具前处理
5.1.1 离心管、枪头经121℃±2℃高压蒸汽灭菌15min。
5.1.2 医用棉签经121℃±2℃高压蒸汽灭菌15min。
5.2 样品的采集和处理
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