细胞免疫疫荧光技术.pptVIP

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2020-08-27 发布于福建
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细胞免疫疫荧光技术.ppt

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细胞免疫荧光技术实验目的拿握免疫荧光技术的基本原理熟悉细胞免疫樊光技术的方法了解在免疫细胞化学技求中如何获得好的尖验结果实验原理原位检测显示荧光抗原抗体特异反应激发光间接法荧光素标记的抗抗体抗原 Vinculin Hela细胞间接荧光抗体染色法示意图实验用品试荆材料: 固定:4%PFA Hela细胞細胞通透:0.2% TritonX 細胞培养皿封闭试剂:10%正常山羊血清一抗:小鼠娠抗Ⅵ vinculin单克隆抗体仪景二抗: Alexa fluor55:记的山羊抗小鼠lgG类光显微镜 DAP(4,6-二滕基2-苯基吲噪) PBS洗涤级冲漩:PH74 实验步骤 ,细胞制备和细胞圄定将缃胞備在将细胞墙养加入4%PFA 24孔板中垩所需密度圄定10min 或保存 PBS洗涤(, PBS洗潺一实验步骤二,细胞免疫荧光|CC染色 Y入一我加入二抗如入DAPI复桑 PBS PBS PBS 洗涤 0.2% TritonX 封闭 4℃过夜37℃1-2小肘37℃5 光显微镜 10min 金30min 现塞实验结票上命三,观察 human hela cells 实验中应注意的问题细胞不要铺的过密:60-70% 防止细胞污染固定附间不要太长,一般10-30min Trion处理附间不宜过长,膜昼白可不必处理选择合适的封闭漩二抗孵育后,一定要洗干净必要附用恒温摇床摇洗免疫细胞化学技术 ※※ 免疫荧光技术标记物使抗体或抗原 2.免疫酶技术抗体复合物在各种显傲镜下 3.免疫亲和技术可见的物质 4.胶体金技术免疫细胞化学技术注意事项游选择合适的方法材料要留好选择抗体选择标记酶封闭漩的选择设定对照实验